[發(fā)明專利]制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310101285.3 | 申請(qǐng)日： | 2013-03-26 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103196725A | 公開（公告）日： | 2013-07-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王志民;程秀蘭;黃偉東;侯彩玲;王躍;張林霞 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N1/28 | 分類號(hào)： | G01N1/28;G01N33/531 |
| 代理公司： | 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭國中 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 制備 富集 單個(gè) 納米 攜帶 單根多聚物 分子 方法 | ||
1.一種制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征在于，該方法在獲得連接單根熒光分子的多聚物分子的單個(gè)微納米珠即目的復(fù)合物和空微納米珠的混合物后，采用一內(nèi)部有溶液通道的流室，該流室溶液通道上游有進(jìn)樣口和電泳緩沖液填充口；
將所述混合物通過進(jìn)樣口注入流室，同時(shí)將電泳緩沖液通過電泳緩沖液填充口注入流室，流室下游有目的復(fù)合物收集口和空微納米珠出口；
將連接目的復(fù)合物收集口的容器連接電源正極，與目的復(fù)合物收集容器對(duì)應(yīng)的流室溶液通道另一側(cè)連接電源負(fù)極，利用外加電場，使攜帶凈負(fù)電荷的目的復(fù)合物進(jìn)入目的復(fù)合物收集容器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備與富集單個(gè)微納米攜帶接單根多聚物分子的方法，其特征是，所述獲得連接單根多聚物分子的單個(gè)微納米珠和空微納米珠的混合物，按照以下方法制備：
步驟一，在多聚物分子的一端標(biāo)記一種活性基團(tuán)，另一端或側(cè)鏈標(biāo)記熒光分子，純化后用連接緩沖液重新溶解；
步驟二，采用能與步驟一活性基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)的活性基團(tuán)包被的微納米珠，與經(jīng)步驟一處理過的多聚物混合，通過連接反應(yīng)將多聚物分子連接到微納米珠上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的活性基團(tuán)，是能用于實(shí)現(xiàn)連接多聚物分子與微納米珠的活性基團(tuán)對(duì)；所述的活性基團(tuán)是中性、酸性或堿性，后兩種情況下，用能使之鈍化的試劑鈍化連接產(chǎn)物中的微納米珠表面，使微納米珠表面不攜帶凈電荷。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的活性基團(tuán)對(duì)包括生物素-抗生物素蛋白、地高辛-抗地高辛抗體、氨基-環(huán)氧基、氨基-羧基、氨基-羰基、巰基-馬來酰亞胺、巰基-環(huán)氧基、巰基-巰基、巰基-羰基、羧基-酰肼基、羰基-酰肼基中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的多聚物分子數(shù)目與微納米珠數(shù)目的比例按1比大于或等于10混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或5所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的微納米珠，是單分子多聚物運(yùn)載工具，其材質(zhì)是硅、磁性材料或多聚物，其直徑在納米至微米量級(jí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備與富集單個(gè)微納米攜帶接單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的多聚物分子，是核酸、核酸與蛋白質(zhì)以及核酸與人工合成的肽核酸多聚物分子連接后的嵌合體中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述電泳緩沖液的設(shè)置方式為側(cè)流或鞘流方式；設(shè)置為測(cè)流時(shí)，目的復(fù)合物收集口及空微納米珠出口分別對(duì)應(yīng)于流室溶液通道上游的填充電泳緩沖液和樣品溶液進(jìn)入流室溶液通道時(shí)的位置，設(shè)置為鞘流時(shí)，目的復(fù)合物收集口與空微納米珠出口分叉設(shè)置；所述的進(jìn)樣口和電泳緩沖液填充口連接進(jìn)樣控制器用于控制進(jìn)樣速度。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述正極和負(fù)極間的外加電場，在各種條件確定后，將目的復(fù)合物牽引至目的復(fù)合物收集容器所需的最小電壓閾值Vmin，通過計(jì)算得到，或通過顯微鏡觀察得到，只要外加電壓V≥Vmin，后續(xù)就不再借助光學(xué)手段而進(jìn)行直接分離和富集目的復(fù)合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備與富集單個(gè)微納米珠攜帶單根多聚物分子的方法，其特征是，所述的目的復(fù)合物在外加電場驅(qū)動(dòng)下，離開溶液通道中的樣品溶液流，進(jìn)入目的復(fù)合物收集容器；所述流室通道的溶液進(jìn)入或者不進(jìn)入目的復(fù)合物收集容器，當(dāng)不進(jìn)入目的復(fù)合物收集容器時(shí)，該容器中事先加滿電泳緩沖液流。
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