[發明專利]一種動物細胞培養用膠原蛋白覆層微載體及其制備方法

有效

• 申請號: 201310099817.4
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103215217A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 馬光輝;周煒清;康躋耀;張貴峰;蘇志國;孫李靖;李娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C08J9/36;C12N5/07
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種膠原蛋白覆層微載體，其特征在于，所述微載體的基質為魔芋葡甘聚糖微球，膠原蛋白的覆層量為基質微球質量的1%-10%，覆層的膠原蛋白通過活化試劑與基質微球共價偶聯。

2.根據權利要求1所述的微載體，其特征在于，所述的基質微球的粒徑為50-500μm，優選為100-300μm，進一步優選160-250μm；

優選地，所述的基質微球含水量為80%以上；

優選地，所述的膠原蛋白為豬明膠、魚明膠、牛明膠或其混合物；

優選地，所述的膠原蛋白分子量為3,000-50,000，優選5,000-50,000，進一步優選5,000-20,000；

優選地，所述的活化試劑為含環氧基團的長鏈試劑，優選長鏈試劑至少含有6個碳原子，進一步優選1,4-丁二醇二縮水甘油醚、雙環氧化丁二烯、正丁基縮水甘油醚、烯丙基縮水甘油醚或其混合物。

3.根據權利要求1或2所述的微載體的制備方法，包括如下步驟：

a)在魔芋葡甘聚糖微球中加入活化試劑與催化劑，在堿性環境下進行活化反應，得到活化的魔芋葡甘聚糖微球；

b)將步驟a)得到的所述微球清洗抽干后，加入NaHCO₃-Na₂CO₃緩沖液中，加入膠原蛋白，進行偶聯反應；

c)將步驟b)反應完畢的體系混勻后，加入水中，膠原蛋白在微球表面覆層凝聚后，清洗微球；

d)將步驟c)處理好的微球加入反應容器中，再加入交聯試劑與PBS緩沖液，攪拌使其反應，反應完畢清洗后即得所述的微載體產品。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟a)中所述的活化試劑為含環氧基團的長鏈試劑，優選長鏈試劑至少含有6個碳原子，進一步優選1,4-丁二醇二縮水甘油醚、雙環氧化丁二烯、正丁基縮水甘油醚、烯丙基縮水甘油醚或其混合物；

優選地，所述活化劑的用量為1-10mmol/g微球；

優選地，所述的催化劑為硼氫化鈉，優選其加入量為0.5-50mg/g微球，進一步優選0.5-25mg/g微球；

優選地，所述的堿性環境由陽離子為堿金屬離子，陰離子為氫氧根離子的堿性溶液提供，優選為NaOH或KOH溶液；

優選地，所述堿性溶液濃度為0.1-3M，優選0.5-3M，進一步優選0.5-2M；

優選地，所述的堿性溶液的加入量為0.5-5mL/g微球；

優選地，所述活化反應的活化溫度為15-65℃，優選25-65℃；

優選地，所述活化反應的反應時間為0.5-24h，優選為0.5-10h，進一步優選為3-6h。

5.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于，步驟b)中所述的NaHCO₃-Na₂CO₃緩沖液的pH為8-12，優選9-12，進一步優選10-12；

優選地，所述偶聯反應的反應溫度為15-65℃，優選30-65℃；

優選地，所述偶聯反應的反應時間為0.5-24h，優選為0.5-10h，進一步優選為3-6h。

6.根據權利要求3-5之一所述的制備方法，其特征在于，步驟c)中所述的水為0-10℃的水，優選為0-10℃的去離子水；

優選地，所述的水的加入量為5-100mL/g微球。

7.根據權利要求3-6之一所述的制備方法，其特征在于，步驟d)中所述的交聯試劑為雙醛基類、雙環氧類、二亞胺類、疊氮類分子或其混合物，優選為丙二醛、丁二醛、碳化二亞胺、二異氰酸酯、京尼平、戊二醛或疊氮二苯基磷或其混合物，進一步優選為丁二醛、碳化二亞胺、二異氰酸酯或其混合物；

優選地，所述的交聯試劑的量為1-10mmol/g微球；

優選地，所述的交聯反應溫度為15-65℃，交聯反應時間為0.5-24h；

優選地，所述的PBS緩沖液的pH為7-8，用量為2-10mL/g微球。

8.根據權利要求3-7任一項所述的制備方法，其特征在于，所述的膠原蛋白為豬明膠、魚明膠、牛明膠或其混合物。