[發明專利]從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法

有效

• 申請號: 201310099519.5
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103172598A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 趙家凡;王昌全;鄭萬奎
• 申請（專利權）人: 四川祥光農業科技開發有限公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 成都蓉信三星專利事務所 51106
• 代理人: 劉克勤;賀元

技術領域

本發明涉及植物枝葉中天然有機化合物的提取方法，具體是一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法。

背景技術

紫杉醇是從紅豆杉植物上提取的一種化合物，主要適用于治療卵巢癌和乳腺癌，以及肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤等，是繼阿霉素后最有效的抗癌新藥之一，總有效率達75%以上。長期以來，紫杉醇是從紅豆杉的樹皮中提取的，由于紅豆杉的樹皮為不可再生資源，導致紫杉醇的獲取原料非常有限；加之，紅豆杉是世界上公認的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物，在自然條件下生長速度緩慢，再生能力差，世界范圍內還沒有形成大規摸的紅豆杉原料林基地，中國已將其列為一級珍稀瀕危保護植物，聯合國也明令禁止采伐，從而使得紫杉醇的獲取原料更為匱乏。

曼地亞紅豆杉（Taxus?madia）是紅豆杉中的一種，是原產于美國、加拿大的天然雜交品種，其不僅樹皮中含有紫杉醇，而且枝葉中所含的紫杉醇高達0.03%以上，4～5年生的曼地亞紅豆杉枝葉所含紫杉醇高于70～80年生的天然紅豆杉樹皮所含的紫杉醇含量。因而，曼地亞紅豆杉枝葉已成為相關企業獲取紫杉醇的重要原料。但是，由于紅豆杉枝葉中含有大量的色素、蠟質油脂及相似物質等雜質，這些雜質使得紫杉醇的分離提取操作更為復雜，傳統從紅豆杉樹皮中提取紫杉醇的方法根本無法適用。為此，本領域的各大企業不惜花費巨額資金組織科研人員進行了大量、反復的研究，各種研究成果在公開出版物上屢見報道，例如中國專利文獻公開的“一種從紅豆杉植物枝葉中初分離紫杉醇的方法”（公開號：CN1631084，公開日：2005年6月29日）、“從曼地亞紅豆杉枝葉中同時提取紫杉醇和10-DABⅢ的方法”（公開號：CN102212045，公開日：2011年10月12日）等，這些技術雖能從紅豆杉的枝葉中有效分離提取紫杉醇，但其純化效果非常不理想，無法直接達到藥用標準（中國藥典2010年版），需要進行后續的純化操作，從而增加紫杉醇的提取成本，提取效率低，不能適宜規模批量化生產。

發明內容

本發明的目的在于：針對上述紅豆杉枝葉中紫杉醇的提取現狀，及現有技術的不足，提供一種操作容易、分離徹底、純化率高、能直接達到藥用標準的從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法。

本發明為實現上述技術目的，采用的技術方案是，一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，包括下列步驟：

1）.?在室溫條件下，將粉碎的1000kg紅豆杉枝葉用5m³甲醇水浸泡10h以上，甲醇水的濃度為70～90%；將浸泡液過濾；

2）.?將步驟1）得到的濾液采用活性炭柱過濾脫色；

3）.?將步驟2）得到的脫色液進行減壓濃縮；采用三氯甲烷或二氯甲烷將減壓濃縮得到的產品分4次進行萃取，合并萃取液；

4）.?將步驟3）得到的萃取液在60～80℃的溫度條件下進行常壓回收溶劑；在溶劑回收后的液體中加入適量石油醚，使液體脫脂脫蠟、結晶沉淀，過濾，真空干燥，得初品；

5）.?將步驟4）得到的初品經三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為200～300kg；采用洗脫劑對硅膠柱中的層析液進行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二者混合體積之比為100：1～2；采用TLC及HPLC檢測洗脫流份中的紫杉醇，當檢測到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進行減壓濃縮，并真空抽干減壓濃縮產品，得紫杉醇含量≥1.5%的粗品；

6）.?將步驟5）得到的粗品攪拌進60～80kg的硅膠中，將攪拌好的硅膠裝柱；采用洗脫劑對硅膠柱進行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、異丙醇和甲醇的混合液，三者混合體積之比為100：4～6：0.5～2；采用TLC及HPLC檢測洗脫流份中的紫杉醇，當檢測到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進行減壓濃縮并烘干，得紫杉醇含量≥12%的半成品；

7）.?將步驟6）得到的半成品用5～10倍重量的丙酮溶解；在攪拌狀態下加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置5～10h，過濾，烘干，得紫杉醇含量≥30%的半成品；

8）.?將步驟7）得到的紫杉醇含量≥30%半成品經二氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為30～60kg；采用洗脫劑對硅膠柱中的層析液進行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇的混合液，三者混合體積之比為100：8～10：2～4；采用TLC及HPLC檢測洗脫流份中的紫杉醇，當檢測到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進行減壓濃縮至干，得紫杉醇含量≥95%的半成品；