[發明專利]一種蛋清粉源糖肽的制備工藝

無效

• 申請號: 201310099419.2
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103224969A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 劉靜波;陸春婷;張燕
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 王恩遠

技術領域

本發明屬于食品制備的技術領域，涉及一種具有體外抗S180肉瘤細胞作用的蛋清粉源糖肽制備工藝。?

背景技術

糖蛋白（Glycoprotein）是一種糖鏈通過共價鍵與蛋白質或者多肽結合形成的結合蛋白質。大多數情況下，糖鏈所占比例遠小于蛋白質或者多肽。糖蛋白作為一種蛋白質糖基化修飾物，普遍存在于生物體內，參與細胞分化、免疫調解、腫瘤轉移等機體功能活動。在生物體外，源于食物的植物糖蛋白及動物糖蛋白也呈現了不同程度的功能作用，如金蠔蘑中提取得到的糖蛋白成分對U937白血病細胞具有生長抑制作用；山藥糖蛋白的抗氧化活性；甘薯可溶性蛋白的降血脂及增強免疫力活性等。?

糖肽（Glycopeptide）作為糖蛋白的酶解產物同樣擁有多種生理活性。Takashi?Y,Hisanori?T,Hifumi?O,et?al.的文章Interaction?between120kDa?fragment?in–subunit?from?egg?white?ovomucin?and?Sarcoma-180cells?through?basic?fibroblast?growth?factor?receptor[J].Food?Sci?Technol,2000,6(4):275-279.給出從鮮蛋清中提取得到卵粘蛋白酶解片段的方法，并指出產物能有效抑制S180肉瘤細胞生長。但是，公開的卵粘蛋白酶解片段的制備方法過程繁雜，并不利于環境保護。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是，克服背景技術的缺點，提供一種蛋清粉源功能性糖肽的制備方法，得到一種在體外可抑制S180肉瘤細胞生長的糖肽。?

本發明工藝參數是經過單因素結合Box-Behnken響應面法優化而來。?

具體技術方案如下：?

一種蛋清粉源糖肽的制備工藝，取鮮蛋清粉加水溶解，料液質量比為1∶3～4，添加NaCl，使NaCl在水中的濃度為100～300mmol/L，在40～50℃溫度下提取30～50min，濾過不溶物得到濾液；按照濾液與賽維試劑（sevage試劑）體積比1∶2～3的比例在濾液中添加賽維試劑，脫蛋白30～50min，取上層提取液；按上層提取液計80～100U/g的埃爾克斯酶（alcalase酶）添加到上層提取液中，?在pH值8～10，溫度40～60℃下酶解80～120min，滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。?

本發明最佳的技術方案見實施例3。?

所述的賽維試劑，是正丁醇與氯仿按體積比為1∶3～4的混合物。?

制得的目標物，即蛋清粉源糖肽可以在4℃冷藏備用。?

使用本發明方法制得的目標物是蛋清粉源糖肽。目標物經紫外光譜測定，在280nm及220nm波長下均存在紫外吸收峰，說明氨基與糖基在目標物中同時存在；測試表明，蛋清粉源糖肽對S180肉瘤細胞具有體外抑制作用。?

所述的蛋清粉源糖肽的水解度在19.77%～21.83%。?

本發明的方法過程簡單，反應條件溫和，成本低，產物活性高易溶于水，對環境沒有任何污染；制得的具有體外抗S180肉瘤細胞作用的蛋清粉源糖肽，在糖肽濃度40～100ug/mL范圍內對S180肉瘤細胞的抑制率可達23.45%～43.89%。?

具體實施方式

以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何限定。?

實施例1本發明優選的實施方式（1）?

取新鮮蛋清粉，溫和條件下加水溶解，料液質量比為1∶3，適當添加NaCl，濃度控制在100mM/L，在50℃溫度下提取50min，濾過不溶物得濾液。按照體積比濾液∶sevage試劑為1∶3的比例添加sevage試劑，其中sevage試劑中的正丁醇與氯仿體積比例為1∶3，脫蛋白50min，取上層提取液。酶添加量按上層提取液計，范圍控制在80U/g添加alcalase酶進行酶解，pH值為10，酶解時間80min，溫度60℃，所得蛋清粉源糖肽的水解度為19.91%。最后滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。?

實施例2本發明優選的實施方式（2）?