[發明專利]P15發夾構建體及應用

在審

• 申請號: 201310098037.8
• 申請日: 2007-05-02
• 公開（公告）號: CN103224943A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 埃馬紐利·勞伯;于貝爾·吉耶;肯·理查茲;熱拉爾·若納爾;埃洛迪·克萊因;戴維·吉爾默
• 申請（專利權）人: 西斯凡德爾哈維公眾公司
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12N15/63;C12N5/10;A01H5/00
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 傅強國;賈師英

1.一種人工核酸分子，其含有序列SEQ?ID?NO：11。

2.如權利要求1所述的人工核酸分子，其特征在于，所述序列SEQ?ID?NO：11被分散于病毒有義序列和病毒反義序列之間，所述人工核酸分子編碼、或者是一個發夾RNA結構。

3.如權利要求2所述的人工核酸分子，其特征在于，含有有義核苷酸序列和反義核苷酸序列，所述有義核苷酸序列和反義核苷酸序列被一個連接物核苷酸序列分隔開，所述連接物含有SEQ?ID?NO：11或者由SEQ?ID?NO：11組成。

4.如權利要求3所述的人工核酸分子，其特征在于，其為人工發夾RNA分子。

5.如權利要求1-4中任一項所述的人工核酸分子，其特征在于，其為基因修飾過的TGB-3病毒序列，其包括選自下組的序列：

(a)一種核苷酸序列，其含有SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：3的反義序列；

(b)一種核苷酸序列，其含有SEQ?ID?NO：3中至少20個連續核苷酸的片段和所述SEQ?ID?NO：3片段的反義序列；

(c)一種核苷酸序列，其含有基因修飾過的SEQ?ID?NO：3和所述修飾過的SEQ?ID?NO：3的反義序列；以及

(d)一種核苷酸序列，其含有基因修飾過的SEQ?ID?NO：3中至少20個連續核苷酸的片段和所述基因修飾過的SEQ?ID?NO：3片段的反義序列；

其中，當在細胞中轉錄時，所述基因修飾過的TGB-3病毒序列能形成雙鏈自補的RNA分子，

并且所述基因修飾過的TGB-3病毒序列還包含分散于有義和反義序列之間的內含子序列SEQ?ID?NO：11，其中當被轉錄入細胞中時，所述TGB-3病毒序列能形成發夾RNA分子。

6.如權利要求5所述的TGB-3病毒序列，其特征在于，在所述修飾過的SEQ?ID?NO：3序列中，所述SEQ?ID?NO：3序列的翻譯啟始密碼子和/或終止密碼子被修飾，以抑制翻譯。

7.如權利要求5或6所述的TGB-3病毒序列，其特征在于，含有SEQ?ID?NO：9。

8.如權利要求5或6所述的TGB-3病毒序列，其特征在于，其由SEQ?ID?NO：9組成。

9.一種載體，其含有如權利要求5-8中任一項所述的基因修飾過的TGB-3病毒序列。

10.如權利要求9所述的載體，其特征在于，其可操控地連接到一個或多個在植物細胞中有活性的調控序列上。

11.一種通過如權利要求9或10所述的載體表達的雙鏈自補RNA分子。

12.一種在植物或植物細胞中導入病毒抗性的方法，包括：

制備含有如權利要求2-8中任一項所述的人工核酸分子的核酸構建體，該構建體可操控地連接到一個或多個在植物細胞中有活性的調控序列上，以及

用所述核酸構建體轉化植物細胞，由此在植物或植物細胞中導入病毒抗性。

13.一種在植物或植物細胞中誘發全部RNA2、以及尤其是TGB-3移動蛋白轉錄后基因沉默機制的方法，包括下述步驟：

制備含有如權利要求2-8中任一項所述的人工核酸分子的核酸構建體，該構建體可操控地連接到一個或多個在植物細胞中有活性的調控序列上，以及

用該核酸構建體轉化植物細胞，由此在所述植物細胞中的表達能形成雙鏈自補的RNA分子，并引發PTGS機制。

14.如權利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述植物細胞是氣孔細胞。

15.如權利要求12-14中任一項所述的的方法，其特征在于，還包括由轉化過的植物細胞再生轉基因植物。

16.如權利要求12-15中任一項所述的的方法，其特征在于，所述調控序列含有在植物中有活性的啟動子序列或終止子序列。

17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述啟動子序列是組成型序列或外來的啟動子序列。

18.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述啟動子序列選自由35S花椰菜花葉病毒啟動子和擬南芥多聚泛素啟動子所構成的組。