[發明專利]用于制備牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201310097949.3
• 申請日: 2013-03-25
• 公開（公告）號: CN103183728A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 巴利民;齊鵬;肖進;栗利芳;宋芳;董春娜;趙洪濤;鄭應華;鄭明舉;張愛民;馬愛榮
• 申請（專利權）人: 中國牧工商（集團）總公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;C07K1/34;C07K1/06;C07K1/04;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體而言，本發明涉及一種用于制備牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽，以及含有這些多肽的疫苗及它們的制備方法。

背景技術

口蹄疫（foot?and?mouth?disease，簡稱FMD）是一種偶蹄動物發生的急性、高度接觸性、發熱性傳染病，在世界范圍內廣泛分布。口蹄疫的傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜后將導致幼畜死亡，成年動物生產能力急劇下降，因此嚴重危害畜牧業的發展和肉食及其畜產品的生產和供應。目前，口蹄疫使動物及動物產品的市場流通和國際貿易受到極大的封鎖和限制，給流行國家和地區畜牧業生產造成巨大的經濟損失。

口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的。口蹄疫病毒屬于細小核糖核酸病毒，具有多型性、易變性等特點。目前，已知全世界有7種血清型的口蹄疫病毒：A、O、C、Sat1（南非I型）、Sat2（南非II型）、Sat3（南非III型）和Asia?I（亞洲I型）。這些主型中的每一種又分若干亞型，目前發現的亞型已有70多種。血清型A、O、C和Asia?I型的口蹄疫病毒最為常見，其中血清型A病毒的變種最多，具有超過30種亞型。研究結果表明，口蹄疫病毒的衣殼蛋白是由四種結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4（Logan?D等，1993年）組成的，每種各60個。VP1-VP3組成衣殼蛋白亞單位，位于衣殼蛋白的外側，而VP4位于病毒顆粒的內部。VP1是主要的保護性抗原，現已發現O型口蹄疫有3個主要的抗原位點位于VP1上，其中133-160和200-213位構成了VP1上最重要且最容易變異的保護性抗原位點。

口蹄疫病毒各型之間的抗原性不同，彼此之間不能交互免疫。而且，在同一種血清型中抗原差異的程度也很大，以至于能夠有效地抵抗一種亞型的口蹄疫疫苗可能針對同一血清型中的另一種亞型沒有保護性。此外，口蹄疫毒株的抗原性還在不斷發生變化，隨著時間的推移，原有疫苗的效力減弱甚至消失，因此給口蹄疫的防治工作帶來了很大的困難。

當前在我國牛群中流行的口蹄疫主要是O型、ASIA?I型和A型口蹄疫。我國對口蹄疫實行強制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。但是，我國現行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒滅活疫苗，其存在著生物安全性差、副反應大、產品質量不穩定等問題。相比之下，目前世界上很多國家已經停止使用滅活疫苗，也禁止從使用滅活疫苗的國家進口畜產品。由此可見，在口蹄疫防治方面，我國已落后于世界發展形勢。

在口蹄疫新型疫苗的研究方面，先后有基因工程亞單位疫苗、口蹄疫病毒載體疫苗、口蹄疫基因工程修飾疫苗的研究報道，但是其在免疫效果、生物安全性方面都存在著諸多問題，影響了這些新型疫苗的使用。此外，這些疫苗對于當前已經發生變異的流行毒株往往效果較差，不能有效地保護動物。因此，本領域仍然存在對于安全、有效的口蹄疫新型疫苗的需求。

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種用于制備牛口蹄疫O型合成肽疫苗的多肽，以及含有該多肽的疫苗。

本發明的另一個目的是提供一種上述多肽以及疫苗的制備方法。

本發明的又一個目的是提供上述多肽以及疫苗的用途。

為實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一方面，本發明提供一種用于制備牛口蹄疫O型肽疫苗的多肽，所述多肽包含如SEQ?ID?NO.?1所示的氨基酸序列。此序列為口蹄疫O病毒的核心B細胞表位序列，負責產生針對口蹄疫病毒的中和抗體。

SEQ?ID?NO.?1：

YNGNCKYGENAVTNVRGDLQVLAQKAARCLPTSFNYGAIK

本發明中提及的“多肽”和“合成肽”為同一概念，均是指通過固相有機合成得到的肽物質。

優選地，所述多肽還包含具有增強免疫作用的口蹄疫內源或外源性T細胞表位氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列選自SEQ?ID?NO.?2、SEQ?ID?NO.?3和SEQ?ID?NO.?4中的一個或多個。在本發明中，由計算機預測口蹄疫O病毒的T細胞表位，然后利用軟件設計新的T細胞表位肽，再通過體外評價動物細胞免疫水平，由此篩選得到上述氨基酸序列的多肽，其能夠輔助B細胞表位產生中和抗體。

SEQ?ID?NO.?2：

AGLAGVMVTESVAFRKKV

SEQ?ID?NO.?3：

VAQHNLSTEAIPLVVHESLMIVAQSIAGELKV

SEQ?ID?NO.?4：

SPGQVVYNRPHNSAYKV