[發明專利]一種性能改進的重組金黃色葡萄球菌蛋白A親和配基及其構建方法

有效

• 申請號: 201310097553.9
• 申請日: 2013-03-26
• 公開（公告）號: CN103214563A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 夏海鋒;吳璞強;梁振東;王沙莉;鄭夢杰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;C12N15/31;C12N15/70;C12N15/10;C12R1/445
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1.一種性能改進的重組金黃色葡萄球菌蛋白A，其特征在于重組蛋白A分子結構由1到10個Z片段串聯組成。

2.根據權利要求1所述的一種性能改造的重組金黃色葡萄球菌蛋白A，其特征在于編碼Z片段的基因具有序列表SEQ?ID.3所述的核苷酸序列。

3.根據權利要求1所述的一種性能改造的重組金黃色葡萄球菌蛋白A，其特征在于Z片段的氨基酸殘基具有序列表SEQ?ID?No.8所述的氨基酸序列。

4.根據權利要求1所屬的一種性能改造的重組蛋白A，其特征在于Z序列是由B序列改造得到的，是在B片段的Loop2后面添加6個甘氨酸，并將第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分別替換成蘇氨酸和丙氨酸，在Z序列的C端添加有2個半胱氨酸。

5.根據權利要求1所述的一種性能改造的重組蛋白A，其特征在于1到10個Z片段串聯后具有序列表SEQ?ID?No.8-17所述的氨基酸序列。

6.一種如權利要求1所述的性能改造的重組蛋白A的構建方法，其特征在于克隆并改造Z基因序列的3對引物F₀和R₀、F₁和R₁、F₂和R₂，其核苷酸序列分別為SEQ?ID?No.1、SEQ?ID?No.2、SEQ?ID?No.4、SEQ?ID?No.5、SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7，利用重疊PCR得到Z序列，使用一組同尾酶和限制性內切酶BamH?I將1到10個Z序列進行串聯得到Z_n序列，利用一組限制性內切酶將Z_n連接到質粒pET-28a，轉化感受態E.coli?BL21(DE3)得到產不同個數Z序列串聯的重組蛋白A菌株，通過一定終濃度的IPTG誘導獲得由1-10個Z片段組成的重組金黃色葡萄球菌蛋白A。

7.根據權利要求6所述的一組同尾酶，其特征在于是Nhe?I和Xba?I。

8.根據權利要求6所述的一組限制性內切酶，其特征在于是Noc?I和BamH?I。