[發明專利]一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法

無效

• 申請號: 201310097321.3
• 申請日: 2013-03-25
• 公開（公告）號: CN103163113A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 劉冰峰;任宏宇;任南琪;謝國俊;趙磊;馬超
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/30
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 高會會

1.一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于它是按下列步驟實現的：

一、取微藻藻液，經離心收集固相物，加入等體積的去離子水或超純水，得重懸微藻細胞，將其分成兩份待用；

二、將步驟一得到的一份重懸微藻細胞，在溫度為0～4℃的條件下超聲破碎1～30min；

三、向步驟二超聲破碎后的重懸微藻細胞中加入尼羅紅混勻，避光染色1～30min，將染色后的微藻細胞分為兩份；

四、取步驟三中的一份染色后的微藻細胞，采用三維熒光光譜對步驟三染色后的微藻細胞測定熒光強度；

五、取步驟三中另一份的染色后的微藻細胞，采用二維熒光光譜測定熒光強度，將染色后的微藻細胞二維熒光光譜所測定的熒光強度數值減去尼羅紅和未進行尼羅紅染色微藻細胞在二維熒光光譜相同波長下測得的熒光強度數值之和，即得相對熒光強度，然后取步驟一中的另一份重懸微藻細胞采用有機溶劑提取法測定油脂含量，構建相對熒光強度-油脂含量標準曲線；

六、根據標準曲線公式計算待測微藻的油脂含量；

標準曲線公式為：y=0.0268x-1.5532；其中，R²=0.9957，y為油脂含量，單位為mgL^-1；x為相對熒光強度；

其中，步驟三中所述的尼羅紅加入量為加入尼羅紅至溶液中尼羅紅的濃度為0.1～5.0mgL^-1；步驟四中所述的三維熒光光譜激發波長為220～750nm，發射波長為220～750nm；步驟五中所述的二維熒光光譜的激發波長為450～550nm，發射波長為500～700nm。

2.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于所取藻液的體積為3～60mL。

3.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于步驟一中所述的微藻藻液所用微藻為小球藻、柵藻、硅藻、隱甲藻、扁藻、杜氏藻、螺旋藻或金藻。

4.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于步驟二中所述的超聲條件為：超聲時間為3～30s，間隔時間為2～6s，超聲功率為15～150W。

5.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于步驟三中所述的尼羅紅加入量為加入尼羅紅至溶液中尼羅紅的濃度為1.0～3.0mgL^-1。

6.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于步驟五中所述的二維熒光光譜的激發波長為530～540nm，發射波長為565～575nm。

7.根據權利要求1所述一種超聲輔助熒光染色檢測微藻油脂含量的方法，其特征在于步驟五中所述的有機溶劑提取法為氯仿-甲醇法、索氏抽提法、正己烷-異丙醇法、正己烷-乙醇法或乙醚-石油醚法。