[發明專利]一種黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因及其高效表達方法有效
| 申請號： | 201310095971.4 | 申請日： | 2013-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN103146726A | 公開（公告）日： | 2013-06-12 |
| 發明（設計）人： | 吳敬;劉旭;吳丹;陳堅 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/56 | 分類號： | C12N15/56;C12N15/81;C12N9/30;C12R1/685;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335 | 代理人： | 陳圣清 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 曲霉 葡萄 糖苷酶 基因 及其 高效 表達 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因，其特征在于其基因核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.一種表達權利要求1所述基因的方法，其特征在于，將二硫鍵異構酶基因與權利要求1所述α-葡萄糖苷酶基因agluOP在畢赤酵母中共表達。
3.根據權利要求2所述方法，其特征在于，步驟如下：
1）將agluOP基因和質粒pPIC9K同時用Not?I酶切連接得到pPIC9K-agluOP；
2）重組質粒經過Bgl?II酶切線形化后轉化進P.pastoris；
3）pPICZA-pdi經Sac?I單酶切線性化后電轉至P.pastoris/pPIC9K-agluOP中，挑選轉化子。
4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，將感受態細胞涂布于含0.5mg/mL?G418抗性濃度的MD平板，然后挑取單菌落點種于含梯度Zeocin抗性的YPD平板。
5.根據權利要求2所述方法，其特征在于，所述畢赤酵母為P.pastorisKM71。
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