[發(fā)明專利]稻谷內(nèi)源性酶激活法生產(chǎn)高GABA功能食品材料的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310095563.9
• 申請日: 2013-03-25
• 公開（公告）號: CN103181523A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王立峰;陳靜宜
• 申請（專利權(quán)）人: 南京財(cái)經(jīng)大學(xué);王立峰
• 主分類號: A23L1/105
• 分類號: A23L1/105;A23L1/185;A23L1/29;C12N9/88
• 代理公司: 南通市永通專利事務(wù)所 32100
• 代理人: 葛雷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域，特別是涉及利用稻谷內(nèi)源性酶激活法生產(chǎn)高GABA功能食品材料的方法，改善食物產(chǎn)品結(jié)構(gòu)和營養(yǎng)結(jié)構(gòu)。

背景技術(shù)

作為一種具有多種生理功能的生物活性因子，GABA在美國、日本等國家已廣泛用于營養(yǎng)補(bǔ)充劑和功能食品中，1996年，富含GABA的米胚芽制品在日本實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化。日本科學(xué)家利用米胚芽等原料開發(fā)制造的富含GABA的功能食品配料，將其應(yīng)用于飲料、果醬、糕點(diǎn)、餅干、調(diào)味料等制品中。現(xiàn)有報(bào)道顯示，應(yīng)用生物技術(shù)制造的高濃度GABA飲料以及利用乳酸菌等制作的富含GABA的食品配料，均可直接作為或者用于抗高血壓、增進(jìn)腦機(jī)能及肝功能的功能食品。上世紀(jì)九十年代中期，日本ORYZA油化學(xué)公司開發(fā)出一種名為GABARICEGERM的保健食品添加劑，其后不久，日本食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會報(bào)道了該產(chǎn)品在改善失眠、抑郁和更年期綜合癥等方面的顯著效果，證實(shí)了GABA的多種生理作用，并指出富含GABA的食品是一種功能性食品。2007年日本可口可樂公司推出了面向大眾的、具有放松和抗緊張效果的GABA功能性飲料“AQUARIUS?SHARP?CHARGE”，GABA產(chǎn)品市場得到了進(jìn)一步的擴(kuò)展，而我國在這方面的研究尚處于起步階段，亟待發(fā)展和提高。

利用高產(chǎn)GABA品種的發(fā)芽糙米內(nèi)源酶轉(zhuǎn)化提高發(fā)芽糙米中GABA的含量，對功能型稻米品種選育，稻米深加工及發(fā)芽糙米食品的研究開發(fā)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種易操作，效果好的稻谷內(nèi)源性酶激活法生產(chǎn)高GABA功能食品材料的方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：

一種稻谷內(nèi)源性酶激活法生產(chǎn)高GABA功能食品材料的方法，其特征是：

（1）在明確稻米內(nèi)源性谷氨酸脫羧酶特性和活性調(diào)節(jié)機(jī)制的基礎(chǔ)上，采用谷氨酸脫羧酶激活技術(shù)，生產(chǎn)高GABA含量的稻米健康食品；

（2）以富含GABA的發(fā)芽糙米為原料，采用鈍化分解GABA的轉(zhuǎn)氨酶預(yù)處理，生產(chǎn)留胚GABA精白米；

（3）采用含有谷氨酸脫羧酶激活劑和特殊緩沖體系的天然培養(yǎng)液進(jìn)行發(fā)芽；?

（4）以米糠、米胚芽作為GAD源，將其固定化后生產(chǎn)富集GABA的食品配料，并將其應(yīng)用到GABA營養(yǎng)配合米粉生產(chǎn)中。

一種稻谷內(nèi)源性谷氨酸脫羧酶的制備方法，其特征是：包括下列步驟：

（1）γ-氨基丁酸的制備：稱取糙米置于盤中，先用自來水沖洗一遍，洗去表面的雜質(zhì)和灰塵，再加入4倍體積的水浸泡，將浸泡后的糙米均勻地?cái)傆诒P中，加入水，蓋上濕潤的紗布，發(fā)芽；然后稱取發(fā)芽糙米，加入水磨成漿狀，制成糙米漿；取一定量的糙米漿，在其中加入底物L(fēng)-谷氨酸、輔酶PLP及激活劑CaCl_2?，在PBS緩沖液中轉(zhuǎn)化生成GABA；

（2）谷氨酸脫羧酶提取：稱取發(fā)芽糙米，加入由磷酸緩沖液、維生素B₆、?EDTA、β-巰基乙醇及NaCL組成的提取緩沖液研磨勻漿，靜置提取后離心，上清液即為谷氨酸脫羧酶提取液；

（3）谷氨酸脫羧酶分離純化：谷氨酸脫羧酶提取液中加入(NH₄)₂SO₄至?30%飽和度，靜置，冷凍離心去除部分雜蛋白；上清液加入(NH₄)₂SO₄至?50%飽和度，靜置，冷凍離心棄去上清液，收集沉淀，沉淀溶于標(biāo)準(zhǔn)緩沖液；在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中透析至無?NH₄⁺，得到?GAD?粗酶液，冷凍干燥保存；采用?DEAE-Sephrose?FF?陰離子交換柱對米胚?GAD?進(jìn)行分離，控制米胚?GAD?的等電點(diǎn)在?4.5~4.7，分離采用磷酸鉀緩沖液進(jìn)行梯度洗脫；再取經(jīng)上述處理得到的米胚?GAD上Superdex?200?凝膠柱，用磷酸鉀緩沖液反復(fù)洗脫，即得分離純化后的谷氨酸脫羧酶。

所述的稻谷內(nèi)源性谷氨酸脫羧酶的制備方法，包括下列步驟：