[發(fā)明專利]一種在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的裝置和方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310094976.5
• 申請(qǐng)日: 2013-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN103163194A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 包建民;李優(yōu)鑫;張勃;高赫男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N1/28
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 李麗萍

1.一種用于在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的裝置，包括三電極電源、毛細(xì)管（1）、第一緩沖液槽（21）、第二緩沖液槽（22）、正電極（31）、負(fù)電極（32）和零極（33），所述毛細(xì)管的柱上設(shè)有檢測器（6）；其特征在于，還包括有一金屬針管（4）；當(dāng)用于在線轉(zhuǎn)移凝膠中的蛋白質(zhì)時(shí)，所述金屬針管（4）套在所述毛細(xì)管（1）的進(jìn)樣端上，所述毛細(xì)管（1）的出口端設(shè)置在第一緩沖液槽（21）中，并通過第一緩沖液槽（21）中的正電極（31）與三電極電源的正極相連，所述金屬針管（4）的上端與零極（33）相連，所述毛細(xì)管（1）的進(jìn)樣端與凝膠的上面接觸，所述負(fù)電極（32）設(shè)置在所述凝膠的下面，所述負(fù)電極（32）與三電極電源的負(fù)極相連；

當(dāng)用于在線分析凝膠中的蛋白質(zhì)時(shí)，將零極（33）放入第二緩沖液槽（22）中，同時(shí)將所述毛細(xì)管（1）的進(jìn)樣端從金屬針管內(nèi)拿出后放入第二緩沖液槽（22）中，所述毛細(xì)管的出口端通過第一緩沖液槽（21）中的正電極（31）與三電極電源的正極相連，所述毛細(xì)管的進(jìn)樣端通過第二緩沖液槽（22）中的零電極（33）與零極相連。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的裝置，其特征在于，所述檢測器為紫外檢測器，但是采用哪種具體的檢測器在本發(fā)明中不受限制，只要是能夠檢測蛋白質(zhì)的檢測器均可采用。

3.一種在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求1或2所述用于在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的裝置，并包括以下步驟：

步驟一、利用平板凝膠電泳裝置進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白質(zhì)處理，并將上述處理好的聚丙烯酰胺凝膠用保鮮膜包好，4℃保存；

步驟二、取一段熔融石英毛細(xì)管，對(duì)該毛細(xì)管進(jìn)行預(yù)處理后備用；

步驟三、聚丙烯酰胺凝膠中蛋白質(zhì)的毛細(xì)管電轉(zhuǎn)移：

向經(jīng)過預(yù)處理后的毛細(xì)管中充滿pH4-9、10-50mM的運(yùn)行緩沖液，其中，包括添加濃度為0.1到1.2mM的十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）；從上述步驟一處理好的聚丙烯酰胺凝膠上切下需要轉(zhuǎn)移的聚丙烯酰胺凝膠，用二甲基亞砜褪色后，根據(jù)膠塊的大小用緩沖液和蒸餾水或用蒸餾水浸泡15～25min后，放在負(fù)電極上，并排除所述負(fù)電極周圍的氣泡；調(diào)整毛細(xì)管的位置，使得毛細(xì)管進(jìn)樣端與聚丙烯酰胺凝膠的表面接觸；轉(zhuǎn)移時(shí)，毛細(xì)管的出口端位于第一緩沖液槽中，對(duì)所述正電極、零極及負(fù)電極同時(shí)施加電壓，并使零極和負(fù)電極之間的電壓為-3.0～-6.0V，毛細(xì)管的兩端施加1～12kV高電壓，并根據(jù)轉(zhuǎn)移目的和凝膠中蛋白質(zhì)含量的不同確定轉(zhuǎn)移時(shí)間的長短，記錄轉(zhuǎn)移時(shí)間和電流變化；

步驟四、檢測被轉(zhuǎn)移出來的蛋白質(zhì)：

轉(zhuǎn)移后，將聚丙烯酰胺凝膠和負(fù)電極、金屬針管撤下，然后將零電極放入到第二緩沖液槽中，將毛細(xì)管的進(jìn)樣端從金屬針管中拿出后插入第二緩沖液槽中，零電極與三電極電源的零極相連，進(jìn)行毛細(xì)管電泳，紫外在線檢測被轉(zhuǎn)移出來的蛋白質(zhì)；

上述步驟一至步驟四均在室溫下進(jìn)行。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述在線轉(zhuǎn)移和分析凝膠中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述緩沖液種類包括醋酸-醋酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、硼酸-硼砂、三羥甲基氨基甲烷（Tris）-HCl。