[發(fā)明專利]一種制備奈西立肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310094866.9
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103275207A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖慶;唐洋明;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/58
• 分類號: C07K14/58;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新的制備奈西立肽的方法。

背景技術(shù)

奈西立肽(Nesiritide)，由Suhoh于1988年從豬腦組織中分離出來，是內(nèi)源性利鈉家族的重要成員之一，主要由心臟分泌。其結(jié)構(gòu)與心鈉素相似，具有利鈉、利尿、擴張血管和抑制腎素分泌等作用，主要用于治療心力衰竭等，適用于患有休息或輕微活動時呼吸困難的急性失代償心力衰竭患者的靜脈治療，其效果較好且副作用小，是一種很有市場前景的多肽藥物。

奈西立肽的結(jié)構(gòu)為：

關(guān)于奈西立肽的制備方法，國內(nèi)外均有報道，US5114923以一種基因工程的方法制備奈西立肽，US20080287650報道以固相合成的方法制備奈西立肽。

中國專利CN200910104860.9和CN200910104861.3報道了一種固相制備和純化的方法；CN201110171152.4報道了一種Ser-Ser-Ser-Ser片段的方法制備奈西立肽。

發(fā)明內(nèi)容

在長肽合成中現(xiàn)有的固相合成容易產(chǎn)生缺省肽等副產(chǎn)物，大部分缺省肽性質(zhì)與目的肽相似，導致難純化、收率低。

本發(fā)明在SPPS(固相多肽合成)的基礎(chǔ)上衍生出一種片段法固相制備奈西立肽的合成方法。

奈西立肽由32個氨基酸殘基組成，因此存在海量的可能片段和偶聯(lián)順序。

1?????????5??????????10??????????15

H-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-

????20????????????????????25????????????????????30

Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH

對此，本發(fā)明經(jīng)過對不同片段偶聯(lián)策略的實驗之后，得到以下片段適合制備奈西立肽：序列(1-7)、序列(8-12)、序列(13-18)、序列(19-25)、序列(26-32)。

本發(fā)明提供一種制備奈西立肽的方法，包括以下步驟：

1)制備5個片段：

片段1，即序列(26-32)，H-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(pbf)-Arg(pbf)-His(Trt)-載體樹脂，

片段2，即序列(19-25)，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-OH，

片段3，即序列(13-18)，F(xiàn)moc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-OH，

片段4，即序列(8-12)，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH，和

片段5，即序列(1-7)，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(Trt)-Gly-OH；

2)將片段2和片段1偶聯(lián)得到肽樹脂I，即Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-載體樹脂；

3)將片段3和肽樹脂I偶聯(lián)得到肽樹脂II，即Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-載體樹脂；

4)將片段4和肽樹脂II偶聯(lián)得到肽樹脂III，即Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-載體樹脂；