[發明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA

無效

• 申請號: 201310093626.7
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103146705A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 康紅軍
• 申請（專利權）人: 康紅軍
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種siRNA，具體而言涉及一種抑制seps1基因表達的siRNA及其制備方法。

背景技術

RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是由小干擾RNA(smallinterferingRNAs，siRNAs)引起的轉錄后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing，PTGS)，廣泛存在于生物體中。RNA干擾技術可用于基因功能研究及生物遺傳改良等多方面用途。自2001年Tuschl等證明合成的雙鏈siRNA在哺乳動物細胞中可實現靶基因特異沉默作用后，siRNA因其特異性、高效性以及作為基因治療藥物的巨大潛力而備受青睞。

作為基因治療工具，siRNA與傳統反義藥物相比更加具有高效、特異等優勢。此外，siRNA還可進行多元化改造，如可以通過與細胞特異性啟動子及可誘導系統結合，實現組織特異性基因沉默，因此具有廣闊的應用前景。研究表明RNAi技術可大大縮短從鑒定靶基因到認識其功能的時間，促進了在藥物發現過程中對已知靶基因功能的高通量分析，還加快了對藥物特異性及其作用機制的評估，以便較快地篩選出候選藥物分子。

siRNA的有效性和優勢在神經系統疾病、炎癥、代謝疾病(肥胖癥，高膽固醇血癥)、腫瘤、感染性疾病等的體內治療實驗中已得到初步證實。siRNA技術是在不破壞或不引起遺傳物質改變的情況下對相關基因進行轉錄抑制的，因此可更完整地闡明該基因的功能。更重要的是，在人類疾病的治療方面，siRNA可與靶基因序列之間產生特異性結合，發揮最佳的治療效果，而且也不會產生明顯的不良副作用。可以預見，一旦siRNA在體內的穩定性、有效性、靶向性等瓶頸問題得到解決，RNAi技術在臨床的應用必將產生質的飛躍。

人類seps1基因位于染色體15q26.3，包含6個外顯子，編碼一個有189個氨基酸的蛋白質。15號染色體的這個區域以前被認為包含影響炎性疾病的數量性狀遺傳位點(quantitative?trait?loci?QTLs)，這些炎性疾病包括胰島素依賴型糖尿病，Alzheimer’s病和腹部疾病。這樣，SEPS1有可能是炎癥相關疾病多樣性的功能因素和位置因素。

近來的研究結果顯示SEPS1與炎癥細胞因子的產生存在直接的聯系，可能在炎癥介導的疾病以及一些其他的免疫異常中起主要作用。許多常見疾病的發生機制都包含了免疫系統的激活，例如糖尿病，腫瘤和心血管疾病。新近的研究顯示炎癥反應持續作用的結果是導致這些疾病的發生。細胞暴露于應激條件下會激活免疫，由此導致循環中促炎癥因子水平升高，這與Selenoprotein?S1(seps1)基因下調相關。

SEPS1在保護內質網功能完整性以抵御潛在的代謝應激中的重要作用是最近才明確的。SEPS1被分類為一個新的內質網膜蛋白，參與錯誤折疊蛋白質由內質網向溶酶體的清除，在溶酶體中通過蛋白酶體進行遍蛋白化和降解。SEPS1也調節細胞氧化還原平衡并保護內質網免受氧化應激的有害作用。功能受損的內質網對這些副作用的反應是誘使一些基因表達，這將導致轉錄因子NF-κB的活化。活化的NF-κB進入細胞核，激活那些編碼促炎性細胞因子的基因轉錄。seps1在2002年被識別，Northern?blot分析顯示seps1mRNA表達于肝臟，骨骼肌，脂肪組織，下丘腦，睪丸，心臟和腎臟。seps1在3個主要胰島素靶組織中高表達：肝臟，脂肪，和骨骼肌，提示其在調解胰島素活性和/或糖代謝中的可能作用。

通過細胞裂解和免疫組織化學研究，Gao等人定位SEPS1蛋白在人類肝細胞的細胞膜和微粒體上。培養的肝腫瘤細胞中seps1基因表達的過度會導致胰島素抵抗，包括葡萄糖攝取下降，糖原合成減少，以及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)胰島素依賴性降低的弱化。慢性炎癥在許多常見疾病中都有病理作用并且受基因和環境因素的雙重影響。炎癥反應增強，促炎因子的高分泌或者是抗炎分子的減少這些進化中的有利面，會導致慢性炎癥狀態，例如肥胖，II型糖尿病和心血管疾病，給現代社會增加負擔。然而，上調seps1基因可能是解決這些疾病的新希望。