[發(fā)明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310093626.7
• 申請(qǐng)日: 2013-03-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103146705A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康紅軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康紅軍
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種siRNA，具體而言涉及一種抑制seps1基因表達(dá)的siRNA及其制備方法。

背景技術(shù)

RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是由小干擾RNA(smallinterferingRNAs，siRNAs)引起的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing，PTGS)，廣泛存在于生物體中。RNA干擾技術(shù)可用于基因功能研究及生物遺傳改良等多方面用途。自2001年Tuschl等證明合成的雙鏈siRNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中可實(shí)現(xiàn)靶基因特異沉默作用后，siRNA因其特異性、高效性以及作為基因治療藥物的巨大潛力而備受青睞。

作為基因治療工具，siRNA與傳統(tǒng)反義藥物相比更加具有高效、特異等優(yōu)勢(shì)。此外，siRNA還可進(jìn)行多元化改造，如可以通過(guò)與細(xì)胞特異性啟動(dòng)子及可誘導(dǎo)系統(tǒng)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)組織特異性基因沉默，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。研究表明RNAi技術(shù)可大大縮短從鑒定靶基因到認(rèn)識(shí)其功能的時(shí)間，促進(jìn)了在藥物發(fā)現(xiàn)過(guò)程中對(duì)已知靶基因功能的高通量分析，還加快了對(duì)藥物特異性及其作用機(jī)制的評(píng)估，以便較快地篩選出候選藥物分子。

siRNA的有效性和優(yōu)勢(shì)在神經(jīng)系統(tǒng)疾病、炎癥、代謝疾病(肥胖癥，高膽固醇血癥)、腫瘤、感染性疾病等的體內(nèi)治療實(shí)驗(yàn)中已得到初步證實(shí)。siRNA技術(shù)是在不破壞或不引起遺傳物質(zhì)改變的情況下對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄抑制的，因此可更完整地闡明該基因的功能。更重要的是，在人類疾病的治療方面，siRNA可與靶基因序列之間產(chǎn)生特異性結(jié)合，發(fā)揮最佳的治療效果，而且也不會(huì)產(chǎn)生明顯的不良副作用。可以預(yù)見(jiàn)，一旦siRNA在體內(nèi)的穩(wěn)定性、有效性、靶向性等瓶頸問(wèn)題得到解決，RNAi技術(shù)在臨床的應(yīng)用必將產(chǎn)生質(zhì)的飛躍。

人類seps1基因位于染色體15q26.3，包含6個(gè)外顯子，編碼一個(gè)有189個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。15號(hào)染色體的這個(gè)區(qū)域以前被認(rèn)為包含影響炎性疾病的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)(quantitative?trait?loci?QTLs)，這些炎性疾病包括胰島素依賴型糖尿病，Alzheimer’s病和腹部疾病。這樣，SEPS1有可能是炎癥相關(guān)疾病多樣性的功能因素和位置因素。

近來(lái)的研究結(jié)果顯示SEPS1與炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生存在直接的聯(lián)系，可能在炎癥介導(dǎo)的疾病以及一些其他的免疫異常中起主要作用。許多常見(jiàn)疾病的發(fā)生機(jī)制都包含了免疫系統(tǒng)的激活，例如糖尿病，腫瘤和心血管疾病。新近的研究顯示炎癥反應(yīng)持續(xù)作用的結(jié)果是導(dǎo)致這些疾病的發(fā)生。細(xì)胞暴露于應(yīng)激條件下會(huì)激活免疫，由此導(dǎo)致循環(huán)中促炎癥因子水平升高，這與Selenoprotein?S1(seps1)基因下調(diào)相關(guān)。

SEPS1在保護(hù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能完整性以抵御潛在的代謝應(yīng)激中的重要作用是最近才明確的。SEPS1被分類為一個(gè)新的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白，參與錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向溶酶體的清除，在溶酶體中通過(guò)蛋白酶體進(jìn)行遍蛋白化和降解。SEPS1也調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原平衡并保護(hù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)免受氧化應(yīng)激的有害作用。功能受損的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對(duì)這些副作用的反應(yīng)是誘使一些基因表達(dá)，這將導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化。活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，激活那些編碼促炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄。seps1在2002年被識(shí)別，Northern?blot分析顯示seps1mRNA表達(dá)于肝臟，骨骼肌，脂肪組織，下丘腦，睪丸，心臟和腎臟。seps1在3個(gè)主要胰島素靶組織中高表達(dá)：肝臟，脂肪，和骨骼肌，提示其在調(diào)解胰島素活性和/或糖代謝中的可能作用。

通過(guò)細(xì)胞裂解和免疫組織化學(xué)研究，Gao等人定位SEPS1蛋白在人類肝細(xì)胞的細(xì)胞膜和微粒體上。培養(yǎng)的肝腫瘤細(xì)胞中seps1基因表達(dá)的過(guò)度會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗，包括葡萄糖攝取下降，糖原合成減少，以及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)胰島素依賴性降低的弱化。慢性炎癥在許多常見(jiàn)疾病中都有病理作用并且受基因和環(huán)境因素的雙重影響。炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，促炎因子的高分泌或者是抗炎分子的減少這些進(jìn)化中的有利面，會(huì)導(dǎo)致慢性炎癥狀態(tài)，例如肥胖，II型糖尿病和心血管疾病，給現(xiàn)代社會(huì)增加負(fù)擔(dān)。然而，上調(diào)seps1基因可能是解決這些疾病的新希望。