[發(fā)明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310093626.7
• 申請(qǐng)日: 2013-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN103146705A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康紅軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康紅軍
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種沉默小鼠seps1基因的siRNA1，其特征在于，siRNA1其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.1，反義鏈序列為SEQ?ID?NO.2。

2.一種干擾seps1表達(dá)的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的siRNA1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，還包括無關(guān)對(duì)照序列siRNA3，所述的無關(guān)對(duì)照序列siRNA3其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.5，反義鏈序列為SEQ?ID?NO.6。

4.一種小鼠seps1基因沉默的方法，包括以下步驟：

1)siRNA的溶解：將權(quán)利要求1或2中任意一項(xiàng)所述的siRNA1的正反義鏈各4OD(132μg)，分別加入132μl?RNase?Free?Water稀釋溶解，并將權(quán)利要求3所述的對(duì)照序列siRNA3的正反義鏈各4OD(132μg)，分別加入132μl

無菌注射用水稀釋溶解。

2)siRNA退火復(fù)合：將權(quán)利要求1或2中任意一項(xiàng)所述的siRNA1正反義鏈各4OD(132μg)等比例混合，同時(shí)將權(quán)利要求3中所述的對(duì)照序列siRNA3的正反義鏈等比例混合，100℃煮沸5min，逐漸自然冷卻至室溫，得到雙鏈siRNA。

3)雙鏈siRNA的脂質(zhì)體包被：將上一步制備的雙鏈siRNA分別與脂質(zhì)體Lipofectamine?2000輕柔緩慢地混合均勻，使用比例為1μl?Lipofectamine?2000：0.5μgRNA。

4)將上一步得到的siRNA1脂質(zhì)體復(fù)合物和無關(guān)對(duì)照序列siRNA脂質(zhì)體復(fù)合物分別加入生理鹽水稀釋，并將其分別注射到不同組實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)，每只動(dòng)物尾靜脈注射10μgRNA，共0.3ml。

5.權(quán)利要求1所述的siRNA1或權(quán)利要求2-3中任意一項(xiàng)所述的試劑盒在制備沉默seps1基因藥物中的應(yīng)用。