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[發(fā)明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA無效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201310093626.7 申請(qǐng)日: 2013-03-22
公開(公告)號(hào): CN103146705A 公開(公告)日: 2013-06-12
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 康紅軍 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 康紅軍
主分類號(hào): C12N15/113 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 100853 北*** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 沉默 小鼠 seps1 基因 sirna
【權(quán)利要求書】:

1.一種沉默小鼠seps1基因的siRNA1,其特征在于,siRNA1其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.1,反義鏈序列為SEQ?ID?NO.2。

2.一種干擾seps1表達(dá)的試劑盒,包括權(quán)利要求1所述的siRNA1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,還包括無關(guān)對(duì)照序列siRNA3,所述的無關(guān)對(duì)照序列siRNA3其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.5,反義鏈序列為SEQ?ID?NO.6。

4.一種小鼠seps1基因沉默的方法,包括以下步驟:

1)siRNA的溶解:將權(quán)利要求1或2中任意一項(xiàng)所述的siRNA1的正反義鏈各4OD(132μg),分別加入132μl?RNase?Free?Water稀釋溶解,并將權(quán)利要求3所述的對(duì)照序列siRNA3的正反義鏈各4OD(132μg),分別加入132μl

無菌注射用水稀釋溶解。

2)siRNA退火復(fù)合:將權(quán)利要求1或2中任意一項(xiàng)所述的siRNA1正反義鏈各4OD(132μg)等比例混合,同時(shí)將權(quán)利要求3中所述的對(duì)照序列siRNA3的正反義鏈等比例混合,100℃煮沸5min,逐漸自然冷卻至室溫,得到雙鏈siRNA。

3)雙鏈siRNA的脂質(zhì)體包被:將上一步制備的雙鏈siRNA分別與脂質(zhì)體Lipofectamine?2000輕柔緩慢地混合均勻,使用比例為1μl?Lipofectamine?2000:0.5μgRNA。

4)將上一步得到的siRNA1脂質(zhì)體復(fù)合物和無關(guān)對(duì)照序列siRNA脂質(zhì)體復(fù)合物分別加入生理鹽水稀釋,并將其分別注射到不同組實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi),每只動(dòng)物尾靜脈注射10μgRNA,共0.3ml。

5.權(quán)利要求1所述的siRNA1或權(quán)利要求2-3中任意一項(xiàng)所述的試劑盒在制備沉默seps1基因藥物中的應(yīng)用。

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1、專利原文基于中國國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利說明書;

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