[發明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA無效
| 申請號: | 201310093626.7 | 申請日: | 2013-03-22 |
| 公開(公告)號: | CN103146705A | 公開(公告)日: | 2013-06-12 |
| 發明(設計)人: | 康紅軍 | 申請(專利權)人: | 康紅軍 |
| 主分類號: | C12N15/113 | 分類號: | C12N15/113;A61K48/00 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 100853 北*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 沉默 小鼠 seps1 基因 sirna | ||
1.一種沉默小鼠seps1基因的siRNA1,其特征在于,siRNA1其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.1,反義鏈序列為SEQ?ID?NO.2。
2.一種干擾seps1表達的試劑盒,包括權利要求1所述的siRNA1。
3.根據權利要求2所述的試劑盒,還包括無關對照序列siRNA3,所述的無關對照序列siRNA3其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.5,反義鏈序列為SEQ?ID?NO.6。
4.一種小鼠seps1基因沉默的方法,包括以下步驟:
1)siRNA的溶解:將權利要求1或2中任意一項所述的siRNA1的正反義鏈各4OD(132μg),分別加入132μl?RNase?Free?Water稀釋溶解,并將權利要求3所述的對照序列siRNA3的正反義鏈各4OD(132μg),分別加入132μl
無菌注射用水稀釋溶解。
2)siRNA退火復合:將權利要求1或2中任意一項所述的siRNA1正反義鏈各4OD(132μg)等比例混合,同時將權利要求3中所述的對照序列siRNA3的正反義鏈等比例混合,100℃煮沸5min,逐漸自然冷卻至室溫,得到雙鏈siRNA。
3)雙鏈siRNA的脂質體包被:將上一步制備的雙鏈siRNA分別與脂質體Lipofectamine?2000輕柔緩慢地混合均勻,使用比例為1μl?Lipofectamine?2000:0.5μgRNA。
4)將上一步得到的siRNA1脂質體復合物和無關對照序列siRNA脂質體復合物分別加入生理鹽水稀釋,并將其分別注射到不同組實驗小鼠體內,每只動物尾靜脈注射10μgRNA,共0.3ml。
5.權利要求1所述的siRNA1或權利要求2-3中任意一項所述的試劑盒在制備沉默seps1基因藥物中的應用。
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