[發明專利]一種沉默小鼠seps1基因的siRNA無效
| 申請號： | 201310093626.7 | 申請日： | 2013-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN103146705A | 公開（公告）日： | 2013-06-12 |
| 發明（設計）人： | 康紅軍 | 申請（專利權）人： | 康紅軍 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;A61K48/00 |
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| 地址： | 100853 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 沉默 小鼠 seps1 基因 sirna | ||
1.一種沉默小鼠seps1基因的siRNA1，其特征在于，siRNA1其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.1，反義鏈序列為SEQ?ID?NO.2。
2.一種干擾seps1表達的試劑盒，包括權利要求1所述的siRNA1。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，還包括無關對照序列siRNA3，所述的無關對照序列siRNA3其正義鏈序列為SEQ?ID?NO.5，反義鏈序列為SEQ?ID?NO.6。
4.一種小鼠seps1基因沉默的方法，包括以下步驟：
1)siRNA的溶解：將權利要求1或2中任意一項所述的siRNA1的正反義鏈各4OD(132μg)，分別加入132μl?RNase?Free?Water稀釋溶解，并將權利要求3所述的對照序列siRNA3的正反義鏈各4OD(132μg)，分別加入132μl
無菌注射用水稀釋溶解。
2)siRNA退火復合：將權利要求1或2中任意一項所述的siRNA1正反義鏈各4OD(132μg)等比例混合，同時將權利要求3中所述的對照序列siRNA3的正反義鏈等比例混合，100℃煮沸5min，逐漸自然冷卻至室溫，得到雙鏈siRNA。
3)雙鏈siRNA的脂質體包被：將上一步制備的雙鏈siRNA分別與脂質體Lipofectamine?2000輕柔緩慢地混合均勻，使用比例為1μl?Lipofectamine?2000：0.5μgRNA。
4)將上一步得到的siRNA1脂質體復合物和無關對照序列siRNA脂質體復合物分別加入生理鹽水稀釋，并將其分別注射到不同組實驗小鼠體內，每只動物尾靜脈注射10μgRNA，共0.3ml。
5.權利要求1所述的siRNA1或權利要求2-3中任意一項所述的試劑盒在制備沉默seps1基因藥物中的應用。
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