[發明專利]一種用于B細胞抗原表位篩查的多肽陣列合成技術

有效

• 申請號: 201310093099.X
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN103245788A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 趙樹民;鮑勇剛;石松傳
• 申請（專利權）人: 趙樹民
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種多肽陣列合成技術，尤指一種用于B細胞抗原表位篩查的多肽陣列合成技術。?

背景技術

在后基因組時代，科學家已經把研究重心從基因組研究轉向蛋白質功能研究，從分子整體水平對蛋白質的組成及其活動規律等生物學功能進行研究，并探索人類健康和疾病的奧秘，即蛋白質組學。對蛋白質與蛋白質或其他物質(如核酸、多糖、化學物等)相互關系的研究是蛋白質組學中的關鍵熱點，而多肽技術正是這關鍵研究熱點的核心技術之一。?

多肽陣列是一種新型生物芯片，是后基因時代揭示各種疾病和生化現象的最直接的研究技術。通過該技術平臺的軟件設計系統和自動化設備，可以將任意設計的氨基酸序列一多肽，在經過特殊處理的芯片上予以高密度地原位合成，每張芯片可承載幾千個甚至更多的原位合成多肽。該陣列技術可以根據已知蛋白的氨基酸序列，按序列漂移原則在芯片上原位合成多肽氨基酸序列，或者也可以根據待測物質的結構任意合成氨基酸序列，并將這些多肽按一定次序高密度地排列在芯片上，然后將測試物質(如抗體、血清、靶蛋白等)和芯片反應，經過免疫或反射等檢測技術發現與測試物質有結合反應的位點/域；同時，結合反應的數據可以輸入計算機進行三維結構處理，從而尋找到蛋白質與測試物質的結合部位。另外，該技術可以根據目標蛋白質設計多肽抑制物或激動劑，使得新藥發現的過程大為縮短。多肽陣列技術被認為是后基因組時代與?基因芯片、蛋白芯片相蓖美的新型蛋白位點檢測技術，而在疫苗、藥物、診斷試劑等研發領域具廣闊的應用前景。?

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種高密度、高通量、可同時測定上萬個多肽相關相互作用的合成技術。?

本發明是一種用于B細胞抗原表位篩查的多肽陣列合成技術，包括以下步驟：?

1)多肽芯片的合成，具體包括：?

1.1多肽微陣列芯片上的多肽合成：用半自動合成儀吸取足量的氨基酸活化溶液點印于纖維素膜上，進行多肽點合成反應；?

1.2多肽微陣列芯片合成中側鏈鈍化；?

1.3多肽微陣列芯片合成中每層Fmoc保護基團的去除；?

1.4多肽微陣列芯片合成過程中的染色；?

1.5重復1.2至1.4步驟繼續合成多肽微陣列芯片，按照預先設定的程序，直至多肽合成完成；?

1.6將完成最后一層氨基酸合成的多肽微陣列芯片膜置于-20℃冰箱保存或直接進行下一步反應；?

2)多肽側鏈保護基團的去除；?

3)多肽芯片的雜交反應。?

所述步驟1.1中的的氨基酸活化溶液的配制方法為：?

1)配制氨基酸激活劑：以DMF為溶劑，配制0.5M?DIC溶液；?

2)配制各種氨基酸儲備液溶液：以DMF為溶劑，配制0.5M?HOBt溶液，?再將配制好的0.5M的HOBt溶液作為溶劑分別配制不同種類的Fmoc保護氨基酸，使溶液達到濃度為0.5M的氨基酸儲備液；?

3)配制氨基酸激活溶液：用步驟1)中配制0.5M的DIC氨基酸激活劑和步驟2)中各種氨基酸儲備液溶液以1∶1的比例混合，所得溶液即濃度為0.25M的氨基酸激活溶液。?

所述氨基酸激活溶液配制后室溫靜置15min以上使用。?

還包括步驟4)多肽微陣列芯片的再生。?

所述步驟1.2多肽微陣列芯片合成中側鏈鈍化的方法為：在多肽微陣列芯片合成每一層結束后，纖維素膜正面朝下置于玻璃平皿中，用鈍化溶液I完全浸潤10min后，棄去鈍化溶液I，加入鈍化溶液II，再次靜置10min，棄去鈍化溶液II，將纖維素膜正面朝上，加入DMF溶液，再震蕩洗膜6次，每次2min，所述鈍化溶液I為2％乙酸酐的DMF溶液，所述鈍化溶液II為含2％酸酐、2％二異丙基胺的DMF溶液。?

所述步驟1.3多肽微陣列芯片合成中每層Fmoc保護基團的去除方法為：多肽微陣列芯片合成中側鏈鈍化后，將纖維素膜放入新的玻璃平皿中，加入去Fmoc保護基團溶液后震蕩反應去除Fmoc氨基保護基團，此步驟重復兩次，每次10min，之后用DMF溶液震蕩洗膜6次，每次2min；再用無水乙醇震蕩洗膜兩次，每次2min，室溫晾干，所述去Fmoc保護基團溶液為含20％Piperidine的DMF溶液。?