[發明專利]一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用途

有效

• 申請號: 201310092794.4
• 申請日: 2013-03-21
• 公開（公告）號: CN103217491A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 麗娟;王艷秋
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

技術領域

本發明涉及一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用途。?

背景技術

人體在氧化代謝的過程中會產生了大量含氧自由基，自由基通過細胞運輸過程會破壞其他分子的結構，導致細胞受損，使人體各預防細胞機能下降、衰老，可誘發癌癥、糖尿病、心血管疾病、腎臟病、動脈硬化、缺血性心臟病、神經系統疾病、眼睛疾病等百余種疾病。研究表明，通過補充抗氧化物質能夠保持機體自由基的產生與消除的平衡，從而防止自由基對細胞和組織的損傷，是預防各疾病的有效措施之一，通過食用功能性的抗氧化食品也是一種即方便又有效的補充抗氧化劑的方法。?

青龍衣，即胡桃科植物胡桃楸Juglans?mandshurica?Maxim.的新鮮未成熟果皮，主要含有黃酮類化合物、萘醌類化合物、二芳基庚烷類化合物，同時還含有甾體、萜類、脂肪酸等成分。青龍衣在中醫臨床上主要用于治療皮膚病、子宮脫垂、白細胞減少等癥。現代研究發現青龍衣具有細胞毒性、抑菌抗炎、鎮痛作用以及顯著的抗癌活性，而其抗氧化活性目前還未見報道，另外，由于中藥的產地、來源、采收季節等情況復雜，如何采用科學、合理的方法控制其質量并與其活性緊密相關，是目前質量控制研究方法的新的思路和趨勢，對保證臨床用藥的安全有效是十分必要的。而指紋圖譜作為從整體上對中藥進行質量控制的一種技術目前已載入2010版中國藥典，其優勢比起單一組分甚至多組分定性定量更加明顯，關于青龍衣的指紋圖譜研究目前有少量文獻報道，現在沒有方法可以建立青龍衣抗氧化提取物的指紋圖譜，因此沒有青龍衣抗氧化提取物的標準指紋圖譜。?

發明內容

本發明是要提供一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用途。?

本發明一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，是按以下步驟進行：?

一、供試品溶液的制備：a、取青龍衣藥材，加10倍質量的質量百分含量為95％乙醇，浸泡72h，過濾，分別收集固相物A和液相物A，將固相物A加入10倍質量的質量百分?含量為95％乙醇中浸泡48h，過濾，分別收集固相物B和液相物B，將固相物B加入10倍質量的質量百分含量為95％乙醇中浸泡24h，過濾，收集液相物C，然后將液相物A、B和C混合，得到浸提液；?

b、將浸提液減壓濃縮至相對密度為1.10～1.14，得到濃縮液，再將濃縮液和水按體積比1∶1混合，然后用質量百分含量為10％的鹽酸調節pH值至2，得到稀釋后的濃縮液；?

c、用與稀釋后的濃縮液等體積的乙酸乙酯溶液對稀釋后的濃縮液進行萃取，收集有機相，重復萃取2次，然后合并有機相，再減壓濃縮至干，得到干燥的固體為青龍衣抗氧化活性提取物；?

d、將步驟c得到的青龍衣抗氧化活性提取物，用甲醇溶解成濃度為1mg/mL的溶液，用微孔濾膜進行過濾，濾液即為供試品溶液；?

二、指紋圖譜的制作：將步驟一得到的供試品溶液注入高效液相色譜儀，以甲醇為A相，質量百分含量為0.2％的磷酸水溶液為B相進行梯度洗脫；?

其中，高效液相色譜條件為：?

色譜柱填料Thermo?C18，規格為250×4.6mm，5μm；柱溫為35℃；流動相為A相甲醇和B相質量百分含量為0.2％磷酸水溶液，流速0.8mL/min，檢測波長250nm，進樣量20μL；?

在此條件下分析供試品溶液，得到青龍衣抗氧化活性提取物的指紋圖譜。?

本發明采用一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法得到的青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜。?

本發明青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜的用途是指青龍衣抗氧化活性提取物指紋圖譜作為標準指紋圖譜用于青龍衣質量控制中。?

本發明提取了青龍衣中具有抗氧化作用的提取物，通過對DPPH自由基清除試驗，證明了該提取物具有優良的抗氧化活性，本發明青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法具有可重復性好、精密度好和穩定可靠的優點。本發明的青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜有4個共有特征峰，這些共有特征峰構成了青龍衣抗氧化活性提取物的指紋特征，可作為青龍衣抗氧化活性提取物的標準指紋圖譜。本發明的青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜作為標準指紋圖譜經多批樣品驗證后可用于青龍衣質量控制中，用于從整體上評價和控制青龍衣藥材的質量，既避免了因只測定一、二個化學成分而判定青龍衣整體質量的片面性，又減少了為質量達標而人為添加對照成分的可能性。?

附圖說明