[發明專利]一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用途

有效

• 申請號: 201310092794.4
• 申請日: 2013-03-21
• 公開（公告）號: CN103217491A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 麗娟;王艷秋
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征在于青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法是按以下步驟進行：

一、供試品溶液的制備：a、取青龍衣藥材，加10倍質量的質量百分含量為95％乙醇，浸泡72h，過濾，分別收集固相物A和液相物A，將固相物A加入10倍質量的質量百分含量為95％乙醇中浸泡48h，過濾，分別收集固相物B和液相物B，將固相物B加入10倍質量的質量百分含量為95％乙醇中浸泡24h，過濾，收集液相物C，然后將液相物A、B和C混合，得到浸提液；

b、將浸提液減壓濃縮至相對密度為1.10～1.14，得到濃縮液，再將濃縮液和水按體積比1∶1混合，然后用質量百分含量為10％的鹽酸調節pH值至2，得到稀釋后的濃縮液；

c、用與稀釋后的濃縮液等體積的乙酸乙酯溶液對稀釋后的濃縮液進行萃取，收集有機相，重復萃取2次，然后合并有機相，再減壓濃縮至干，得到干燥的固體為青龍衣抗氧化活性提取物；

d、將步驟c得到的青龍衣抗氧化活性提取物，用甲醇溶解成濃度為1mg/mL的溶液，用微孔濾膜進行過濾，濾液即為供試品溶液；

二、指紋圖譜的制作：將步驟一得到的供試品溶液注入高效液相色譜儀，以甲醇為A相，質量百分含量為0.2％的磷酸水溶液為B相進行梯度洗脫；

其中，高效液相色譜條件為：

色譜柱填料Thermo?C18，規格為250×4.6mm，5μm；柱溫為35℃；流動相為A相甲醇和B相質量百分含量為0.2％磷酸水溶液，流速0.8mL/min，檢測波長250nm，進樣量20μL；

在此條件下分析供試品溶液，得到青龍衣抗氧化活性提取物的指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征在于梯度洗脫順序為：0min→10min→30min→36min，甲醇35％→45％→60％→60％。

3.根據權利要求1所述的一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征在于步驟一中的微孔濾膜過濾是采用0.45μm微孔濾膜進行過濾的。

4.采用權利要求1所述的一種青龍衣抗氧化活性提取物的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法得到的青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜。

5.根據權利要求5所述的青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜，其特征在于青龍衣抗氧化活性提取物的指紋圖譜有4個共有特征峰，以3號峰為對照峰，共有特征峰的相對保留時間分別為0.717～0.719min、0.819min，1.000min和1.189min，這些共有特征峰構成了青龍衣抗氧化活性提取物的指紋特征，可作為青龍衣抗氧化活性提取物的標準指紋圖譜。

6.青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜的用途，其特征在于青龍衣抗氧化活性提取物標準指紋圖譜作為標準指紋圖譜用于青龍衣質量控制中。