[發明專利]一種蘋果屬植物葉片全蛋白提取方法無效
| 申請號： | 201310089139.3 | 申請日： | 2013-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN103275170A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 張彩霞;叢佩華;張利義;康國棟;田義;王強;楊玲 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院果樹研究所 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001 | 代理人： | 任玉龍 |
| 地址： | 125100 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蘋果 植物 葉片 蛋白 提取 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種蘋果屬植物葉片全蛋白提取方法，其特征在于：所述的蘋果屬植物葉片全蛋白提取方法，具體為：
采摘葉齡為20～25天的幼嫩葉片，無菌水清洗后快速風干，用鋒利刀片去除葉片葉柄部分，準確稱取2克，用液氮在研缽中迅速研磨成精細粉末，粒徑約為40-60微米，研磨時間3分鐘；
加入4ml的勻漿緩沖液，4℃下渦旋振蕩10分鐘；
勻漿液中加入等體積的Tris-飽和酚，具體為三羥甲基氨基甲烷緩沖液配制的pH?8.0的苯酚溶液，4℃下，渦旋搖蕩20分鐘；
將勻漿液轉入離心管中，4℃下15000×g，離心30分鐘，上層酚相轉移新離心管；
重新加入同體積的上述勻漿緩沖液,4℃下渦旋震蕩10分鐘，15000×g離心10分鐘；
繼續回收酚相，加入5倍體積0.1M甲醇醋酸銨溶液，-20℃條件下沉淀4小時以上；
溶液在4℃下，15?000×g，離心10分鐘，沉淀物經冷丙酮（含20mM二硫蘇糖醇）漂洗三次，室溫風干，得到蛋白干粉，-80℃條件下保存備用。
2.按照權利要求1所述的蘋果屬植物葉片全蛋白提取方法，其特征在于：所述的勻漿緩沖液中含有20mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液（pH?7.5）、250mM蔗糖、10mM乙二醇-雙(2-氨基乙醚)四乙酸、1mM苯甲基磺酰氟、1mM二硫蘇糖醇、1%聚乙二醇辛基苯基醚X-100、10%聚乙烯聚吡咯烷酮。
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