[發(fā)明專利]一種產(chǎn)朊假絲酵母蛋白制劑及其在養(yǎng)殖中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310087886.3
• 申請日: 2013-03-20
• 公開（公告）號: CN103289907A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李帥偉;李本濤;何宏軒
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;A23K1/16;A23K1/18;C12R1/72
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體地說是一種固體培養(yǎng)基經(jīng)產(chǎn)朊假絲酵母工程菌發(fā)酵制備產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料的方法及其在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

產(chǎn)朊假絲酵母（Candida?utilis）又叫產(chǎn)朊圓酵母或食用圓酵母，假絲酵母屬產(chǎn)朊假絲酵母種，細(xì)胞呈圓形、橢圓形和圓柱形，大小為3.5～4.5μm×?7～13μm。液體培養(yǎng)無撲醭，產(chǎn)生菌體沉淀和環(huán)狀薄浮膜，能發(fā)酵。麥芽汁培養(yǎng)基上的菌落為乳白色，平滑，有光澤或無光澤，邊緣整齊或呈菌絲狀。在加蓋片的玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上，僅能生成一些原始的假菌絲或不發(fā)達(dá)的假菌絲，或無菌絲。適宜生長溫度為25～28℃。其對動物生產(chǎn)的作用是：能提供動物所需的部分營養(yǎng)物質(zhì)，并且能夠調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡，提高飼料消化率，增強(qiáng)動物機(jī)體免疫力。其蛋白質(zhì)和維生素B的含量都比啤酒酵母高，它能以尿素和硝酸作為氮源，在培養(yǎng)基不需要加入任何生長因子即可生長。它能利用五碳糖和六碳糖，既能利用造紙工業(yè)的亞硫酸廢液，還能利用糖蜜、木材水解液等生產(chǎn)出可食用的蛋白質(zhì)。?

?????產(chǎn)朊假絲酵母（Candida?utilis）富含蛋白質(zhì)、糖類和B族維生素，蛋白質(zhì)含量占細(xì)胞干物質(zhì)的45~55%，并且脂肪含量低，還含有多種酶類、谷胱甘肽和其它無機(jī)鹽等，且發(fā)酵周期短，發(fā)酵工藝成熟。產(chǎn)朊假絲酵母作為一種GRAS（美國食品藥物主管機(jī)構(gòu)給予的檢驗標(biāo)記）安全生物，被美國FDA（食品及藥物管理局）認(rèn)證為可作為食品添加劑的酵母，并能運(yùn)用于食品和制藥行業(yè)，用于食用蛋白和谷胱甘肽等產(chǎn)品的生產(chǎn)。德國、美國等一些國家和地區(qū)廣泛地將產(chǎn)朊假絲酵母用于飼料行業(yè)，作為優(yōu)良的飼用蛋白質(zhì)；或者用于秸稈、菜籽餅等材料的發(fā)酵，用于飼用蛋白的生產(chǎn)或脫毒。產(chǎn)朊假絲酵母具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)化無機(jī)氮為有機(jī)氮的能力，并且在其發(fā)酵過程中會產(chǎn)生大量的生物活性物質(zhì)。因此，利用產(chǎn)朊假絲酵母生產(chǎn)飼用添加劑或發(fā)酵劑具有良好的應(yīng)用前景。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料發(fā)酵生產(chǎn)方法。????

本發(fā)明的另一個目的在于提供該產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料作為添加劑在養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用。

本發(fā)明是使用廣東省微生物研究所菌種保藏中心的產(chǎn)朊假絲酵母菌作為發(fā)酵菌種，菌種保藏編號GIM2.148。通過對產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料進(jìn)行培養(yǎng)基配方的研究，通過單因子試驗，確定為以玉米粉和小麥粉為基礎(chǔ)料（質(zhì)量比為3:1），添加2%葡萄糖，最適無機(jī)鹽和生長因子分別為0.5%?K2HPO4和0.05%生物素；在此基礎(chǔ)上對葡萄糖、K2HPO4及生物素進(jìn)行了3因素3水平正交試驗，篩選出優(yōu)化培養(yǎng)基為：以玉米粉和小麥粉為基礎(chǔ)料（質(zhì)量比為3:1），葡萄糖2%，K2HPO4??1.0%，生物素0.01%。?

以玉米粉和小麥粉作為基礎(chǔ)料，添加適量的碳源、氮源、無機(jī)鹽和生長因子進(jìn)行產(chǎn)朊假絲酵母固體發(fā)酵，降低培養(yǎng)基成本，提高產(chǎn)朊假絲酵母菌密度，為其在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。經(jīng)此方法發(fā)酵生產(chǎn)的產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料含有豐富的蛋白質(zhì)、B族維生素、氨基酸等物質(zhì)，廣泛用作動物飼料的蛋白質(zhì)補(bǔ)充物。它能促進(jìn)動物的生長發(fā)育，縮短飼養(yǎng)期，增加肉量和蛋量，改良肉質(zhì)和提高瘦肉率，改善皮毛的光澤度，并能增強(qiáng)幼畜禽的抗病能力。?

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具體實施方式

實施例1??固體發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)朊假絲酵母蛋白飼料的工藝流程

???1.?菌種活化：

本發(fā)明采用產(chǎn)朊假絲酵母（Candida?utilis）作為發(fā)酵菌種，購于廣東省微生物研究所菌種保藏中心，菌種保藏編號GIM2.148，將-80℃保存的產(chǎn)朊假絲酵母菌種在?YPD固體（蛋白胨?10g，酵母提取物?5g，葡萄糖10g，瓊脂粉15g，加水至1升，高溫高壓滅菌備用）斜面上劃線，28℃培養(yǎng)16~24小時；它和啤酒酵母、克魯維酵母被美國FDA認(rèn)證為作為食品添加劑的酵母，能運(yùn)用于食品、制藥和飼料業(yè)，包括肉制品工業(yè)。在許多國家如德國、美國以及巴西，產(chǎn)朊假絲酵母都被用作于牲畜的飼料。

????2.?制備一級種子：?

????將活化的產(chǎn)朊假絲酵母菌種，用接種環(huán)挑取一環(huán)接種于200?mL?YPD液體（蛋白胨?10g，酵母提取物?5g，葡萄糖10g，加水至1升，高溫高壓滅菌備用）培養(yǎng)基中，將三角瓶置于搖床中，28℃，250rpm，振蕩培養(yǎng)20小時后，制得一級種子液。

3.?配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基：?