[發明專利]藥物中五味子醇甲含量的測定方法

在審

• 申請號: 201310086464.4
• 申請日: 2013-03-19
• 公開（公告）號: CN104062365A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 霍際偉;于國江;李凈;祁星星;柴振平
• 申請（專利權）人: 石家莊以嶺藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，具體涉及藥物成分含量的測定方法。

背景技術

護肝片具有疏肝理氣，健脾消食，降低轉氨酶作用。用于慢性肝炎及早期肝硬化等。10版藥典中護肝片使用HPLC進行檢驗，其中五味子乙素用HPLC需要用大約40min～60min，而且難分離。UPLC相對于傳統的HPLC，具有檢測時間短，分離度高等優點，用于護肝片中五味子醇甲的檢測能夠克服其用時長，難分離的缺點。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是提供一種檢測時間短、分離度高的測定藥物中五味子醇甲含量的測定方法。

本發明所采用的技術方案是：

一種藥物中五味子醇甲含量的測定方法，由以下步驟組成：

A、供試樣品溶液的制備：稱取該藥物，研細，加正己烷浸泡12-24小時，于80～85℃回流提取6小時，提取液低溫蒸干，然后再加甲醇微熱使溶解，搖勻，即得；

B、對照品溶液的制備：稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.5mg的溶液，即得；

C、UPLC檢測：色譜柱為C18，流動相為甲醇-水；

D、標準曲線的制定及計算結果: 將濃度不同的對照品溶液注入步驟C中超高效色譜儀中分析，以色譜峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，得到對照樣品溶液的標準曲線；然后將供試樣品溶液注入超高效色譜儀中分析，將峰面積帶入標準曲線中，得到五味子醇甲的含量。

作為優選，所述步驟C中甲醇-水的比例為72：28，流速為0.30ml·min^-1，進樣量為2μl，檢測波長為254nm。

由于采用了上述技術方案，本發明取得的技術進步是：

本發明采用UPLC測定護肝片中五味子醇甲的含量，檢測時間大大縮短，提高了工作效率，減少流動相的使用量，降低了分析成本；解決了HPLC對部分中藥成分分離度差的問題，使得測量結果更加快速，準確；進一步拓展了液相色譜的應用范圍，特別是對于基質復雜的混合組分的分析，通過UPLC方法研究可獲得更高的分析通道。

為了驗證該方法的精密度，做了如下實驗：

1.儀器與試藥

1.1儀器UltiMate_3000，色譜柱：Waters C₁₈，1.7μm，2.1*50mm。

1.2試藥對照品：五味子醇甲（中檢所：110765-200710），供試品：護肝片（批號：100501，石家莊以嶺藥業），所用試劑均為色譜純。

2.實驗方法與結果

2.1用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（72：28）為流動相，流速為：0.30ml·min^-1，進樣量為2μl，檢測波長為254nm。理論板數按五味子醇甲峰計算應不低于6000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品研細，取2.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加正己烷適量，浸泡過夜，于80～85℃回流提取6小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3線性關系的觀察

按照對照品的制備，精密制定對照品溶液每1ml含0.02mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.5mg的對照品溶液，各精密量取2μl，注入色譜儀，以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。回歸方程： Y= 45.019X+0.0653，r = 0.9999，表明五味子醇甲在0.02 mg～0.5mg范圍內線性關系良好。

2.4 精密度試驗

取處理好的供試品測定，精密吸取樣品2μl，連續進樣5次，峰面積依次為：4.5623、4.5682、4.5663、4.5572、4.5591，計算 RSD為0.10%。

2.5 供試品溶液穩定性試驗

按含量測定項下的，在室溫條件下，對同一樣品溶液每隔0、4、8、12、24h進樣，記錄色譜圖，所得峰面積依次為：4.5555、4.5582、4.5693、4.5482、4.5691，按峰面積計算RSD為0.33%，樣品在24小時內基本穩定。

2.6重現性實驗：