[發明專利]香豆素衍生物及其制備方法以及彈性蛋白酶活性檢測方法和檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310086356.7
• 申請日: 2013-03-18
• 公開（公告）號: CN104031014A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 楊光富;楊文超;李俊;孫琦;張春芳
• 申請（專利權）人: 華中師范大學
• 主分類號: C07D311/18
• 分類號: C07D311/18;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王鳳桐;周建秋

1.一種香豆素衍生物，該香豆素衍生物如式（1）所示，其中，R₁為五氟乙基和七氟丙基中的一種，R₂為三氟甲基、甲基、氰基、吡啶環和苯并噻唑環中的一種；

式（1）。

2.權利要求1所述的香豆素衍生物的制備方法，其特征在于，該方法包括在親核反應條件和縛酸劑存在下，在有機溶劑中，將式（2）所示的化合物與酰氯或酸酐接觸；

式（2）

其中，所述酰氯選自五氟丙酰氯，七氟丁酰氯中的一種，所述酸酐選自五氟丙酸酐、七氟丁酸酐中的一種。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其中，相對于1毫摩爾的式（2）所示結構化合物，所述酰氯或酸酐的用量為1-3毫摩爾，所述縛酸劑的用量為1-3毫摩爾，所述有機溶劑的用量為10-20毫升。

4.根據權利要求2或3所述的制備方法，其中，所述親核反應條件包括：溫度為零下5℃至30℃，時間為10-120min。

5.根據權利要求2或3所述的制備方法，其中，所述縛酸劑為三乙胺、二乙胺、二異丙基胺、吡啶、N,N-二甲氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸鉀、碳酸銫、碳酸鈉和碳酸氫鈉中的至少一種，所述有機溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、氯仿、四氯化碳、乙腈、丙酮、乙二醇二甲醚、N,N-二甲基甲酰胺和1,2-二氯乙烷中的至少一種。

6.權利要求1所述的香豆素衍生物在檢測彈性蛋白酶的活性中的應用。

7.一種彈性蛋白酶的活性的檢測方法，其特征在于，該方法包括：

將待測樣品與權利要求1中所述的香豆素衍生物接觸，得到接觸后的物料；

檢測接觸后的物料在激發光下發出的熒光強度的增加值，所述熒光強度的增加值指示了待測樣品中彈性蛋白酶的活性；所述激發光的波長為340-430nm，所述熒光的發射波長為450-520nm。

8.權利要求7所述的檢測方法，其中，相對于1μM的彈性蛋白酶，所述香豆素衍生物的用量為1-100μM。

9.權利要求7或8所述的檢測方法，其中，接觸的條件包括：溫度為25-37℃，pH值為6-8，時間為5-30min。

10.一種彈性蛋白酶的活性的檢測試劑盒，該檢測試劑盒包括：權利要求1所述的香豆素衍生物、彈性蛋白酶標準品以及反應緩沖液。