[發(fā)明專利]一種促進(jìn)產(chǎn)氣莢膜梭菌高產(chǎn)外毒素的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法和其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310086236.7
• 申請(qǐng)日: 2013-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN103160555A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊媛媛;蔣玉文;漆世華;黃濤;鄭佳;朱薇;謝紅玲;溫文生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/00
• 分類號(hào): C12P21/00;C07K14/33;A61K39/08;A61K38/16;A61P31/04;A61P1/00;A61P1/12;C12R1/145
• 代理公司: 北京慶峰財(cái)智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11417
• 代理人: 劉元霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種促進(jìn)產(chǎn)氣莢膜梭菌高產(chǎn)外毒素的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法和其應(yīng)用。

背景技術(shù)

產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium?perfringens)又名魏氏梭菌，是一種重要的人畜共患病的病原體，可引起多種畜禽疾病，如仔豬紅痢、雞壞死性腸炎、兔出血性下痢、羔羊痢疾、羊腸毒血癥、牛腸毒血癥等，也能引起人的氣性壞疽和食物中毒。人們根據(jù)其發(fā)病快的特征將其命名為“猝死癥”。發(fā)病動(dòng)物多以發(fā)病急、病程短、病死率高為特征，往往未見任何前期癥狀就來不及治療而導(dǎo)致牲畜死亡，造成畜牧養(yǎng)殖業(yè)極大的經(jīng)濟(jì)損失。

孔繁德（孔繁德，陳瓊，我國家畜促死癥的病因與防治對(duì)策，《中國獸醫(yī)雜志》,1999年,(3):50-52）等研究認(rèn)為，“目前魏氏梭菌是家畜猝死癥的主要病原”，引起猝死癥的致病因子在于產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的外毒素。Haagsma（J.Haagsma.Pathogenetic?anaerobic?bacteria?and?the?environment[J].Rev.sci.tech.Off.Int.Eqiz.,1991,10(3):749-764）、柴同杰（柴同杰,馬瑞華,常維山,等.產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌病的流行致病機(jī)制探討，《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》，2001年,23(1):70-72）等研究指出，“魏氏梭菌的致病原因在于其分泌的毒素和代謝產(chǎn)物，無毒素產(chǎn)生則不會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀”，“動(dòng)物魏氏梭菌感染導(dǎo)致的猝死癥，主要由腸毒血癥造成機(jī)體主要器官的衰竭所致”。

迄今已發(fā)現(xiàn)α，β，γ，δ，ε，η，θ，ι，κ，λ，μ，ν12種外毒素，其中，以α，β，ε，ι外毒素較為常見。根據(jù)產(chǎn)生外毒素種類的不同，將產(chǎn)氣莢膜梭菌分為A、B、C、D、E五種毒素型。每種毒素型菌均可產(chǎn)生α毒素。A型菌主要產(chǎn)α毒素；B型菌主要產(chǎn)α、β、ε毒素；C型菌主要產(chǎn)α、β毒素；B型菌、C型菌的致病因素主要為β毒素；D型菌主要產(chǎn)α、ε毒素，且ε毒素為主要的致病因子；E型菌主要產(chǎn)α、ι毒素，但其發(fā)病率較低。

外毒素的化學(xué)成分為蛋白質(zhì)，具有較好的免疫原性。根據(jù)魏氏梭菌的發(fā)病機(jī)理，制備不同型的魏氏梭菌毒素，然后將其滅活脫毒制成類毒素疫苗或?qū)㈩惗舅刂苽涑煽苟舅兀糜陬A(yù)防和治療畜禽的“猝死癥”，具有比菌苗更為高效、可靠的免疫效果。Uzal等（Uzal?FA.,Kelly?WR.Protection?of?goats?against?experimental?enterotoxaemia?by?vaccination?with?Clostridium?perfringens?type?D?epsilon?toxoid.Veterinary?Record,1998,142:722-725）以山羊?yàn)閷?duì)象，設(shè)置ε類毒素疫苗免疫組、商用菌苗免疫組和不免疫對(duì)照組，研究了魏氏梭菌類毒素疫苗的免疫效果。結(jié)果表明，類毒素免疫組抗體效價(jià)最高，攻毒后獲得保護(hù)；菌苗免疫組抗體效價(jià)較低，攻毒后有輕度的腹瀉；未免疫對(duì)照組攻毒后出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉等癥狀。柴同杰等（柴同杰，劉文波，魏氏梭菌類毒素疫苗研制及其免疫家兔抗體消長規(guī)律，《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》,2006年,28(1):101-104）制備類毒素疫苗免疫家兔，保護(hù)效果可靠。魏氏梭菌類毒素疫苗可有效控制魏氏梭菌病的流行，用類毒素制備的抗毒素血清還能夠用于患畜的緊急搶救治療。

大量生長繁殖產(chǎn)氣莢膜梭菌，使其分泌高效價(jià)的外毒素是制備高質(zhì)量類毒素疫苗的關(guān)鍵。目前，一般使用厭氣肉肝湯、厭氣肉肝胃酶消化湯培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌。這些培養(yǎng)基的配制工藝復(fù)雜，包括購肉、冷庫保存、剔選、絞碎、保溫消化、提清過濾等工序，需要消耗大量的人力、物力，且生產(chǎn)周期較長，并受肉品質(zhì)的影響而影響培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性，進(jìn)而影響疫苗的品質(zhì)。產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)毒素能力與細(xì)菌菌株、培養(yǎng)基組成有關(guān)，還與培養(yǎng)溫度、pH值、培養(yǎng)時(shí)間等培養(yǎng)條件相關(guān)。因此，研究適合產(chǎn)氣莢膜梭菌生長繁殖且良好產(chǎn)毒的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)產(chǎn)氣莢膜梭菌高產(chǎn)外毒素的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由下述重量份的成分組成：牛肉浸粉18-30重量份，大豆蛋白胨6-15重量份，葡萄糖4-8重量份，NaCl3-6重量份，加水至1000重量份。

本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)基由下述重量份的成分組成：牛肉浸粉25重量份，大豆蛋白胨10重量份，葡萄糖5重量份，NaCl5重量份，加水至1000重量份。

本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)基的pH值為7.0-8.5，優(yōu)選pH值為7.5-8.0。