[發明專利]一種絲氨酸蛋白酶編碼基因和重組酶及應用

無效

• 申請號: 201310085174.8
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103160527A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 侯進慧
• 申請（專利權）人: 徐州工程學院
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N9/52;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

1.一種重組絲氨酸蛋白酶編碼基因，其特征在于：所述酶基因序列為SEQ?ID?NO.1。

2.根據權利要求1所述的一種絲氨酸蛋白酶編碼基因，其特征在于：所述重組絲氨酸蛋白酶基因編碼的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

3.一種權利要求1或2所述的一種重組絲氨酸蛋白酶的制備方法，其特征在于：

（1）重組絲氨酸蛋白酶菌株DS/BL21(DE3)的構建：

使用引物FDS：GAGCATATGTTTCTTAAACTCTTGCGT，RDS：ATCTCGAGCTACTGACTGCTGTCC；以PCR方法從菌株Pantoea?ananatis?P5（CGMCC?NO.5356）基因組中克隆獲得絲氨酸蛋白酶編碼基因全長，將該基因通過限制性內酶NdeI和XhoI酶切后，連接到原核表達載體pET258中，構建重組質粒pETDS，轉化大腸埃希氏菌E.coli?BL21(DE3)細胞，篩選獲得高效表達重組絲氨酸蛋白酶的菌株，即重組大腸埃希氏菌DS/BL21(DE3)；

（2）重組菌株DS/BL21(DE3)的發酵培養與誘導表達：

將重組菌株DS/BL21(DE3)按1%接種量轉接到50mL?LB（含30μg/mL卡那霉素）液體培養基中于37℃震蕩培養；待OD₆₀₀為0.5時，加入0.1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導4h終止發酵；將發酵液在液氮速凍，放冰水中緩慢融化完全，使用超聲波破碎細胞，10000r/min離心5min，取上清即為酶液。

4.重組絲氨酸蛋白酶的應用，所述絲氨酸蛋白酶能夠應用于生產絲氨酸蛋白酶，應用于蛋白質降解的科研與生產。