[發明專利]使用了酶的測定方法

有效

• 申請號: 201310084573.2
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103305588A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 杉山幸司;米原聰;下地一彥
• 申請（專利權）人: 愛科來株式會社;龜甲萬百歐凱米發株式會社
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 柳春雷

1.一種測定對象物的測定方法，其使用作用于測定對象物的酶(A)和特異性檢測由所述測定對象物生成的生成物(C)的酶(B)來對測定對象物進行測定，所述測定方法包括：

i)在測定對象物不存在的情況下準備共存有酶(A)和酶(B)的試劑(D)；

ii)通過使測定對象物與所述試劑(D)接觸，來使所述酶(A)與所述測定對象物作用而由所述測定對象物生成所述酶(B)實質上不作用的生成物(E)；

iii)使與所述酶(A)不同的酶(F)或酶(A)與所述測定對象物和/或所述生成物(E)作用而生成生成物(C)；以及

iv)通過所述酶(B)檢測所述生成物(C)。

2.根據權利要求1所述的測定方法，其中，所述試劑(D)為包含酶(A)、酶(B)、以及封裝它們的容器的市售包或其一部分的試劑。

3.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述步驟iii)通過在所述步驟ii)之后再添加酶(A)來進行。

4.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述步驟iii)通過在所述步驟ii)之后添加酶(F)來進行。

5.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述步驟iii)通過在所述步驟ii)之后活化酶(A)來進行。

6.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，測定對象物為糖化蛋白質。

7.根據權利要求6所述的測定方法，其中，糖化蛋白質選自由糖化血紅蛋白、糖化白蛋白、HbA1c、以及它們的組合組成的組。

8.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述酶(A)和(F)為蛋白酶。

9.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述酶(B)為果糖氨基酸氧化酶(FAOD)。

10.根據權利要求1或2所述的測定方法，其中，所述生成物(E)為具有7個以上的氨基酸殘基的、包含糖化氨基酸的糖化肽。

11.一種權利要求1至10中任一項所述的測定方法中使用的市售包，其包含酶(A)、酶(B)、以及封裝它們的容器。

12.一種權利要求1至10中任一項所述的測定方法中使用的試劑盒，其包含酶(A)和酶(B)共存的試劑容器。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，還包含封裝在不同容器中的酶(A)或酶(F)。

14.一種用于測定糖化蛋白質的試劑盒，其包含蛋白酶和果糖氨基酸氧化酶(FAOD)共存的試劑容器。

15.一種測定糖化蛋白質的含量的方法，其通過用蛋白酶處理血清或血漿試樣中的糖化蛋白質，用果糖氨基酸氧化酶處理所生成的糖化氨基酸和/或糖化肽，來測定糖化蛋白質的含量，所述方法包括：

在使蛋白酶和果糖氨基酸氧化酶同時與所述試樣中的糖化蛋白質接觸之后，添加與所述蛋白酶不同的蛋白酶，由此水解糖化蛋白質并生成糖化氨基酸和/或糖化肽；以及

使生成的糖化氨基酸和/或糖化肽在過氧化物酶的存在下與所述果糖氨基酸氧化酶和發色試劑作用。

16.一種測定對象物的測定方法，其使用作用于測定對象物的酶(A)、和特異性檢測由所述測定對象物生成的生成物(C)的酶(B)來對測定對象物進行測定，所述測定方法包括：

ii’)通過使測定對象物與包含酶(A)和酶(B)的干試劑(D)接觸，來使所述酶(A)與所述測定對象物作用并由所述測定對象物生成所述酶(B)實質上不作用的生成物(E)；

iii’)使所述酶(A)與所述測定對象物和/或所述生成物(E)作用來生成生成物(C)；以及

iv)通過所述酶(B)檢測所述生成物(C)。

17.根據權利要求16所述的測定方法，其中，所述干試劑(D)具備包含含有所述酶(A)的試劑層、和含有所述酶(B)的試劑層的第1試劑層。

18.根據權利要求16或17所述的測定方法，其中，所述干試劑(D)還具備含有酶(F)的第2試劑層，

在步驟iii’)中，使所述酶(A)和所述酶(F)與所述測定對象物和/或所述生成物(E)作用來生成生成物(C)。

19.一種測定方法，其通過用蛋白酶處理血清或血漿試樣中的糖化蛋白質，用果糖氨基酸氧化酶處理所生成的糖化氨基酸和/或糖化肽，來測定糖化蛋白質的含量，所述測定方法包括：

在使所述試樣與含有蛋白酶和果糖氨基酸氧化酶的干試劑接觸之后，添加與所述蛋白酶不同的蛋白酶，由此水解所述試樣中的糖化蛋白質并生成糖化氨基酸和/或糖化肽；以及

使生成的糖化氨基酸和/或糖化肽與所述果糖氨基酸氧化酶和過氧化物酶作用。