[發(fā)明專利]一種填充床反應(yīng)器制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310083994.3
• 申請(qǐng)日: 2013-03-15
• 公開（公告）號(hào): CN103215330A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭宇星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34;C12R1/225
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種填充床反應(yīng)器制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步驟:

（1）海藻酸鈉固定化瑞士乳桿菌蛋白酶

將瑞士乳桿菌用液體MRS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)16-24h，4℃，4500r/min，離心20min，收集瑞士乳桿菌菌體，并洗滌三次，取瑞士乳桿菌菌體，用pH?7.8?Tris-HCl緩沖液重新懸浮，菌體與緩沖液比例為1g：30mL，攪勻后在300W，破碎時(shí)間3s，間隔時(shí)間5s的超聲波破碎條件下破碎200次，將破碎液于4℃，4500r/min，離心20min，取上清液即為瑞士乳桿菌蛋白酶液；

????在30mL蛋白含量為8mg/mL的瑞士乳桿菌蛋白酶液中加入0.6g海藻酸鈉，37℃水浴攪拌混勻，4℃條件下靜置備用，用注射器吸取混合液，以15cm高度滴入0.1mol/L的氯化鈣溶液中，立即成球，4℃條件下靜置4h，洗滌瀝干，得到固定化瑞士乳桿菌蛋白酶；

（2）海藻酸鈉固定化瑞士乳桿菌蛋白酶填充床反應(yīng)器的制備

把固定化瑞士乳桿菌蛋白酶和乳清蛋白溶液充分混合后裝入填充柱中；固定化瑞士乳桿菌蛋白酶和乳清蛋白溶液先于填充柱中靜置水解8h，然后開啟恒流泵實(shí)現(xiàn)連續(xù)式水解，流速為3.2mL/h，連續(xù)收集2d；

3）乳源ACE抑制肽的超濾

選用截留分子量為6000Da的中空纖維超濾膜進(jìn)行超濾，料液溫度為37℃，超濾壓力為0.05Mpa，超濾液進(jìn)行冷凍干燥后即得到ACE抑制肽產(chǎn)品。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種填充床反應(yīng)器制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的方法，其特征在于，所述乳清蛋白溶液是質(zhì)量濃度5g/100mL的WPC-80濃縮乳清，所述的蛋白酶來源于瑞士乳桿菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種填充床反應(yīng)器制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的方法，其特征在于，固定化瑞士乳桿菌蛋白酶和乳清蛋白溶液先于填充柱中靜置水解一段時(shí)間，然后再進(jìn)行連續(xù)式水解。