[發明專利]一種基于Fe3O4納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310083584.9
• 申請日: 2013-03-17
• 公開（公告）號: CN103175858A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張錦勝;唐群;賴衛華
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，?其特征步驟如下：

1）將檢測目標菌與目標菌的1抗結合形成1抗復合物；

2）檢測目標菌的1抗抗體，即2抗特異性免疫磁珠的制備；

3）將目標菌1抗特異性單克隆抗體在固相載體上的固定；

4）免疫磁珠富集目標菌株，并分離：將第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步結合了1抗的待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標菌后通過施加外加磁場，則磁珠就匯集到磁場一邊，吸走上清液則可以分離出磁珠，若待檢樣本中有目標菌，目標菌首先與1抗結合形成復合物，在加入2抗磁珠后，通過2抗與1抗的相互作用，從而捕獲1抗復合物，被磁珠所富集，加少量無菌的去離子水則形成目標菌的磁珠懸濁液；

4）將富集的磁珠懸濁液加到第3步固定了1抗的單克隆抗體的固相載體上，若存在目標菌則形成雙抗夾心，用無菌的去離子水清洗，則沒有抓取到目標菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標菌，則所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來，用外加磁場分離磁珠的方法，用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠就是抓到目標菌的磁珠；

6）這部分磁珠，加入無菌的去離子水形成磁珠的懸濁液，進行核磁共振的弛豫時間測定，在固定場強下，無菌的去離子水的T1/T2是一個恒定值，以無菌的去離子水為空白，測得的懸濁液的弛豫時間T1/T2相比無菌的去離子水有顯著降低，則說明含有磁珠，從而間接證明樣本中有目標致病菌，磁珠的量與T1/T2的下降呈正比，可以通過加標定量磁珠而間接定量出目標菌的量。

2.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述NMR納米探針為Fe₃O₄納米粒子，納米粒徑小于1000納米。

3.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述的目標菌的最終檢出評價方法基于核磁共振技術的弛豫時間的變化。

4.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述NMR弛豫時間特性，是指自旋-晶格弛豫時間(T1)和自旋-自旋弛豫時間(T2)。

5.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是所述弛豫時間特性，T1采用180??-τ-90??脈沖方法測定，T2采用CPMG序列方法測定。

6.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是目標菌先與1抗結合形成復合物，用2抗特異性免疫磁珠富集、分離，1抗起信號放大作用。

7.根據權利要求1所述的基于Fe₃O₄納米粒子間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法，其特征是1抗指目標菌單克隆抗體，2抗指第1抗體的抗體，可以是單克隆也可以是多克隆抗體。