[發明專利]一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法

有效

• 申請號: 201310083068.6
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103109981A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 郝志剛;羅明;王奎明
• 申請（專利權）人: 高唐華農生物工程有限公司
• 主分類號: A23K1/16
• 分類號: A23K1/16;A23K1/00;C12N1/20;C12R1/10
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及飼用飼料添加劑領域，具體涉及利用地衣芽孢桿菌制備飼料添加劑的方法。

背景技術

養殖戶在養殖家禽家畜時為了達到預防疾病的目的，往往在飼料中添加大量抗生素，其結果是不可避免的造成抗生素濫用，在動物體內產生藥物殘留，最終通過食物鏈在人類身體中蓄積，嚴重威脅人類健康。研究表明地衣芽孢桿菌均是一類益生菌，用其制成的制劑添加到飼料中可起到如下作用：①芽孢桿菌為一種需氧有益菌，其在不利環境中能形成孢子，耐高溫、耐酸堿和溫度變化，進入腸道后能迅速復活；且能通過與致病菌爭奪有限的營養物質，迅速消耗環境中有限氧氣，有利于維持腸內菌群平衡起著重要作用，從而抑制腸道致病菌生長，達到預防治療畜禽腸道疾病的作用；②芽孢桿菌能產生多種消化酶，幫助動物對營養物質的消化吸收，從而促進消化和提高飼料利用率，降低飼養成本；③芽孢桿菌能促進動物腸道相關淋巴組織處于高度的“免疫準備狀態”，同時使免疫器官發育加快，免疫系統成熟快而早，T、B淋巴細胞數量增多，動物體液和細胞免疫水平提高；④芽孢桿菌在動物腸道內生長繁殖，能產生多種營養物質如維生素、氨基酸、有機酸、促生長因子等，參與動物機體新陳代謝，為機體提供營養物質。

由于芽孢桿菌制劑具有上述重要優良特征，因此吸引了眾多國內外學者對其進行深入研究，研究內容主要集中于：芽孢桿菌的篩選(楊曉斌，謝擁葵，韋燕鵬等，益生菌納豆芽孢桿菌的篩選，廣州食品工業科技，2003年增刊)、制備纖溶酶(余功保，郭愛玲，秦巧玲等，一株高產納豆激酶菌株的篩選及其發酵條件的優化，食品科學，2007年第4期)、液體深層發酵工藝(朱健輝，杜連祥，路福平，納豆激酶液態發酵工藝優化，食品與發酵工業，2005年第8期)、粉劑制備工藝(鐘青萍，王發祥，劉家暢，納豆菌活菌干燥制劑的研制，食品工業科技，2005年第8期)等方面，而具體的固體發酵工藝未見報道。

固體發酵法相比液體發酵最大的優點就是生產成本低、原材料簡單、產品產酶活性高、產品的耐高溫、耐酸堿、耐擠壓等耐受能力強。但是固體發酵技術難度大，不容易生產出高質量的芽孢桿菌制劑。目前的芽孢桿菌制劑的生產工藝和發酵培養基配方所生產的制劑活菌含量不高，制劑有效期短，使得產品難以達到理想的疾病預防和生長促進效果。

發明內容

本發明的內容在于，針對現有技術不足，提供一種利用地衣芽孢桿菌制備飼料添加劑的固體發酵培養方法，該方法制得的飼料添加劑活菌含量高，雜菌率低，芽胞活性強，穩定性強，生產成本不高。

本發明采用的技術方案是，一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）菌種制備與活化

把購得的地衣芽孢桿菌的菌種制成懸浮液，加入無菌水稀釋到濃度為10^-8時，在固體平板培養基上對其進行涂布分離或劃線分離，挑取部分單菌落進行生產能力的測定；經反復篩選，確定出經發酵產生的芽孢活性強、活菌數高的菌株代替原來的菌株。

（2）斜面菌種制作

按配方要求配置斜面培養基,斜面培養基的各組份重量份為：牛肉膏5?g，蛋白胨10?g，NaCl?5?g，瓊脂粉20-25?g，加水定容至1000?mL；pH控制在7.2-7.4；

將斜面培養基加熱使各組分充分溶解，調好pH，然后分裝于若干支試管中，密封試管；將試管于121℃滅菌30?min,取出擺斜面，冷卻后備用；

將上述斜面培養基置于干燥箱或培養箱中放置24-48h接入步驟（1）中制備的菌種，其中地衣芽孢桿菌接種量為試管中混合物總重量的1%，在37℃條件下培養24h，制成斜面菌種。

（3）三角瓶液體菌種制作

按配方要求配置液體培養基,液體培養基的各組份重量份為：蛋白胨2?g、牛肉膏3?g、酵母膏2?g、硫酸錳0.2?g、磷酸二氫鉀0.4?g、磷酸氫二鉀0.5?g、蔗糖20?g，加水定容至1000mL；pH控制在7.0-7.2；分裝于若干個500mL的三角瓶中，每支三角瓶裝量為220mL；密封后在121℃溫度下滅菌30min，冷卻后備用；

在無菌條件下，每個三角瓶中的液體培養基接入步驟（2）制得的斜面菌種，其中地衣芽孢桿菌接種量為三角瓶中混合物總重量的10%，對三角瓶進行搖床培養，溫度控制在37℃，轉速為180-200?r/min；搖床培養24h后制得三角瓶液體菌種，備用。

（4）罐頭瓶固體發酵

按配方要求配置固體發酵培養基,固體發酵培養基的各組份重量份為：紅糖0.5％、石灰0.5％，無菌水45%，其余為麩皮；