[發明專利]一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法

有效

• 申請號: 201310083068.6
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103109981A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 郝志剛;羅明;王奎明
• 申請（專利權）人: 高唐華農生物工程有限公司
• 主分類號: A23K1/16
• 分類號: A23K1/16;A23K1/00;C12N1/20;C12R1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）菌種制備與活化

把購得的地衣芽孢桿菌的菌種制成懸浮液，加入無菌水稀釋到濃度為10^-8時，在固體平板培養基上對其進行涂布分離或劃線分離，挑取部分單菌落進行生產能力的測定；經反復篩選，確定出經發酵產生的芽孢活性強、活菌數高的菌株代替原來的菌株；

（2）斜面菌種制作

按配方要求配置斜面培養基,斜面培養基的各組份重量份為：牛肉膏5?g，蛋白胨10?g，NaCl?5?g，瓊脂粉20-25?g，加水定容至1000?mL；pH控制在7.2-7.4；

將斜面培養基加熱使各組分充分溶解，調好pH，然后分裝于若干支試管中，密封試管；將試管于121℃滅菌30?min,取出擺斜面，冷卻后備用；

將上述斜面培養基置于干燥箱或培養箱中放置24-48h接入步驟（1）中制備的菌種，其中地衣芽孢桿菌接種量為試管中混合物總重量的1%，在37℃條件下培養24h，制成斜面菌種；

（3）三角瓶液體菌種制作

按配方要求配置液體培養基,液體培養基的各組份重量份為：蛋白胨2?g、牛肉膏3?g、酵母膏2?g、硫酸錳0.2?g、磷酸二氫鉀0.4?g、磷酸氫二鉀0.5?g、蔗糖20?g，加水定容至1000mL；pH控制在7.0-7.2；分裝于若干個500mL的三角瓶中，每支三角瓶裝量為220mL；密封后在121℃溫度下滅菌30min，冷卻后備用；

在無菌條件下，每個三角瓶中的液體培養基接入步驟（2）制得的斜面菌種，其中地衣芽孢桿菌接種量為三角瓶中混合物總重量的10%，對三角瓶進行搖床培養，溫度控制在37℃，轉速為180-200?r/min；搖床培養24h后制得三角瓶液體菌種，備用；

（4）罐頭瓶固體發酵

按配方要求配置固體發酵培養基,固體發酵培養基的各組份重量份為：紅糖0.5％、石灰0.5％，無菌水45%，其余為麩皮；

將固體發酵培養基混和均勻后分裝入若干罐頭瓶中，瓶口用報紙蓋住，用線系緊；在121℃的溫度下對上述罐頭瓶滅菌60?min；

冷卻后，接入步驟（3）制取的液體菌種，其中地衣芽孢桿菌接種量為混合物總重量的5%；放入37℃的培養間中培養60?h，當芽孢形成率達到90%以上發酵結束，出料后制得成品。

2.如權利要求1所述的一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法，其特征在于：所述步驟（2）中的密封是指在試管上蓋上棉塞，將棉塞和試管口部分包上報紙，用線系緊。

3.如權利要求1所述的一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法，其特征在于：在步驟（2）中每支試管中斜面培養基的裝量為試管總容量的1/3-1/2。

4.如權利要求1到3任意一權利要求所述的一種利用地衣芽孢桿菌制取飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（4）中還包括將制得的成品進一步在發酵瓷盤中發酵的步驟，發酵溫度控制在37℃，培養時間為60?h。