[發明專利]一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法

有效

• 申請號: 201310082517.5
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103225230B
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 趙樹民;鮑勇剛;石松傳
• 申請（專利權）人: 趙樹民
• 主分類號: D21H17/66
• 分類號: D21H17/66;D21H17/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征在于，該方法包括以下 步驟：

1)用20ml?25％三氟乙酸/二氯甲烷溶液漂洗空白定量濾紙兩次，每次20分鐘；

2)用20ml二氯甲烷漂洗濾紙兩次，每次2分鐘；

3)用20ml?10％三乙基胺/二氯甲烷溶液浸泡、反應上述濾紙兩次，每次20分鐘，加 蓋；

4)上述反應完畢后，用20ml二氯甲烷漂洗濾紙兩次，每次5分鐘；

5)用20ml四氫呋喃漂洗濾紙兩次，每次5分鐘；

6)分別配制反應液I和反應液II，反應液I為：10ml的N-(2，3-環氧丙基)鄰苯二 甲酰胺溶液，反應液II為：10ml氯化鋅的四氫呋喃溶液；將步驟5)得到的濾紙放置反應 盒中，加入上述配制的反應液I和反應液II，加蓋密封后，震蕩反應24小時后得到濾紙 膜；

7)停止反應并依次用下述試劑漂洗濾紙膜：

i.20ml四氫呋喃，漂洗濾紙膜兩次，每次20分鐘；

ii.20ml二甲基甲酰胺，漂洗濾紙膜三次，每次5分鐘；

iii.20ml二氯甲烷，漂洗濾紙膜二次，每次2分鐘；

iv.20ml無水乙醇，漂洗濾紙膜三次，每次2分鐘；

8)將濾紙膜放置反應盒中，加入肼反應液，加蓋密封，震蕩反應24小時；

9)停止反應，棄去反應液，再重復一次上述步驟8)的反應；

10)停止反應，棄去反應液，并依次用下述試劑漂洗濾紙膜：

i.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次5分鐘；

ii.20ml?10％醋酸/二氯甲烷溶液，3次，每次2分鐘；

iii.20ml?10％三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液，3次，每次2分鐘；

iv.20ml二甲基甲酰胺，3次，每次2分鐘；

v.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次2分鐘；

vi.將經過上述步驟漂洗過的濾紙膜在空氣中干燥得到纖維膜；

11)將干燥的改性纖維膜放置在反應盒中，加入0.3M氨基酸反應混合液，加蓋，搖擺 震蕩反應4小時；

12)棄去上述反應液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗3次，每次2分鐘；

13)加入20ml?20％六氫砒啶/二甲基甲酰胺溶液，震蕩反應10分鐘后，棄去廢液， 用20ml二甲基甲酰胺漂洗4次，2分鐘/次；再用20ml二氯甲烷漂洗3次，每次2分 鐘；用風機吹干后，密封在塑料薄膜中保存；

所述步驟8)中肼反應液配制方法如下：40ml無水乙醇中加入3ml肼溶液，并在密閉 條件下震蕩反應24小時；

所述步驟11)中0.3M氨基酸反應液配制方法如下：Fmoc-氨基十一酸/1-羥基苯并三 唑/二異丙基碳二亞胺溶解在15ml二甲基甲酰胺中；密閉震蕩反應4小時。

2.根據權利要求1所述的一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征 在于，所述步驟1)中空白定量濾紙型號為Whatman50，三氟乙酸/二氯甲烷溶液體積比為 1∶3。

3.根據權利要求1所述的一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征 在于，所述步驟3)中三乙基胺/二氯甲烷溶液體積比為1∶9。

4.根據權利要求1所述的一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征 在于，所述步驟7)中四種溶液洗膜順序、條件不能顛倒混用。

5.根據權利要求1所述的一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征 在于，所述步驟10)中洗滌溶劑的洗滌順序、條件不能顛倒混用，乙醇/甲醇溶液體積比 為17∶3，醋酸/二氯甲烷溶液的體積比為1∶9，三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液體積比為1∶ 9，乙醇/甲醇溶液體積比為17∶3。

6.根據權利要求1所述的一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，其特征 在于，所述步驟13)中六氫砒啶/二甲基甲酰胺溶液體積比為1∶3；風機使用冷風，將膜 吹干后，密封在塑料薄膜中，在0℃的條件下進行保存。