[發明專利]一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法

有效

• 申請號: 201310082517.5
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103225230B
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 趙樹民;鮑勇剛;石松傳
• 申請（專利權）人: 趙樹民
• 主分類號: D21H17/66
• 分類號: D21H17/66;D21H17/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及纖維膜表面改性技術，尤指一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜 的穩定修飾方法。

背景技術

后基因組時代，科學家們已將研究重點由基因組學研究轉向功能蛋白質組 學研究。蛋白質組學以研究細胞蛋白質的組成和機構，蛋白-蛋白相互作用以 及他們與疾病發病機理之間的關系為主。高通量的多肽陣列技術是研究蛋白質 與其它生物大分子如其它蛋白質、核酸及多糖之間的相互作用研究中關鍵且最 好的技術之一。多肽陣列即通過自動化儀器使用化學合成的方法在固相載體上 (玻璃片，纖維素膜，光盤等)同時進行成百上千個多肽的合成，多肽點以陣 列的形式存在與固相載體上，目前多肽陣列廣泛用于藥物篩選、靶標確認、表 位定位、疫苗開發，以及蛋白相互作用研究。

傳統纖維膜表面結構以羥基(OH)組成，該羥基是纖維膜上能夠發生化 學反應的活性基團。根據膜上多肽陣列合成要求，膜表面需要進行化學改性， 鍵合化學惰性的聯接物。例如：傳統膜化學改性技術是，通過鍵合上單層或多 層β-Ala，可以降低膜表面對多肽陣列的背景影響。該方法雖然能使β-Ala很 好地與羥基結合生成惰性聯接物，覆蓋膜表面，減少羥基對多肽陣列的影響。 但缺點是：1)β-Ala是以酯鍵(-COO-)與膜相連，在做多肽陣列點膜時， 酯鍵(-COO-)易在強酸性條件下斷裂，發生多肽脫落；2)β-Ala分子鏈較短， 即使鍵和多層以上，仍不能很好降低膜表面對多肽陣列的背景影響。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種更為穩定的纖維素膜表面修飾方 法，該方法修飾后的纖維素膜解決傳統修飾方法易斷裂、反應背景高等問題。 通過一系列化學反應，使纖維膜表面結構發生變化，以醚鍵(-O-)形式穩定 地連接上11氨基十一酸酯(11-AUN)。即使在強酸性條件下，仍能保持膜上 多肽穩定，并且能很好降低膜表面對多肽陣列的背景影響。

本發明首先把氨基端保護的2，3環氧丙胺通過醚鍵結合到纖維素膜，然 后成功地耦合上聯接物11氨基十一酸酯。通過此改性后的纖維素膜適合于固 相的多肽或其他寡聚物合成。

本發明是一種用于蛋白芯片合成的纖維素膜的穩定修飾方法，該方法包括 以下步驟：

1)用20ml?25％三氟乙酸/二氯甲烷溶液漂洗空白定量濾紙兩次，每次20 分鐘；

2)用20ml二氯甲烷漂洗濾紙兩次，每次2分鐘；

3)用20ml?10％三乙基胺/二氯甲烷溶液浸泡、反應上述濾紙兩次，每次20 分鐘，加蓋；

4)上述反應完畢后，用20ml二氯甲烷漂洗濾紙兩次，每次5分鐘；

5)用20ml四氫呋喃漂洗濾紙兩次，每次5分鐘；

6)分別配制反應液I和反應液II，反應液I為：10ml的N-(2， 3-epoxypropyl)phthalimide溶液，反應液II為：10ml氯化鋅的四氫呋喃溶液； 將步驟5)得到的濾紙放置反應盒中，加入上述配制的反應液I和反應液II， 加蓋密封后，震蕩反應24小時后得到濾紙膜；

7)停止反應并依次用下述試劑漂洗濾紙膜：

i.20ml四氫呋喃，漂洗濾紙膜兩次，每次20分鐘；

ii.20ml二甲基甲酰胺，漂洗濾紙膜三次，每次5分鐘；

iii.20ml二氯甲烷，漂洗濾紙膜二次，每次2分鐘；

iv.20ml無水乙醇，漂洗濾紙膜三次，每次2分鐘；

8)將濾紙膜放置反應盒中，加入肼反應液，加蓋密封，震蕩反應24小時；

9)停止反應，棄去反應液，再重復一次上述步驟8)的反應；

10)停止反應，棄去反應液，并依次用下述試劑漂洗濾紙膜：

i.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次5分鐘；

ii.20ml?10％醋酸/二氯甲烷溶液，3次，每次2分鐘；

iii.20ml?10％三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液，3次，每次2分鐘；

iv.20ml二甲基甲酰胺，3次，每次2分鐘；

v.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次2分鐘；

vi.將經過上述步驟漂洗過的濾紙膜在空氣中干燥得到纖維膜；

11)將干燥的改性纖維膜放置在反應盒中，加入0.3M氨基酸反應混合液， 加蓋，搖擺震蕩反應4小時；

12)棄去上述反應液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗3次，每次2分鐘；