[發(fā)明專利]基于甘露糖受體MRC-1基因的表達(dá)量篩選抗藍(lán)耳病豬的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310082310.8
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN104046684A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李寧;陳志勝;任立明;胡曉湘
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.用于檢測甘露糖受體MRC-1基因的特異性PCR引物對，其特征在于，所述PCR引物對包括：

上游引物MRC-1-F：5′-GGCGTGTCCACTTACCACAA-3′和

下游引物MRC-1-R：5′-TTGCCTATGAGATCTTTCGTGTCA-3′。

2.一種篩選抗藍(lán)耳病豬的方法，其特征在于，通過檢測豬體內(nèi)甘露糖受體MRC-1基因的表達(dá)量來篩選抗藍(lán)耳病豬品種，抗藍(lán)耳病豬品種在感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒后，豬體內(nèi)甘露糖受體MRC-1基因的表達(dá)量上調(diào)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，通過熒光實(shí)時定量PCR檢測感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒前后豬體內(nèi)甘露糖受體MRC-1基因的表達(dá)量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，熒光實(shí)時定量PCR使用的引物為：

目的基因MRC-1：

上游引物MRC-1-F：5′-GGCGTGTCCACTTACCACAA-3′

下游引物MRC-1-R：5′-TTGCCTATGAGATCTTTCGTGTCA-3′；以及

內(nèi)參基因RPL32：

上游引物RPL32-F：5′-CAACAAGAAAACAAAGCACATGCT-3′

下游引物RPL32-R：5′-GCGGTTCTTGGAAGAGACGTT-3′。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，熒光實(shí)時定量PCR檢測步驟為：

1）提取待測豬樣品組織中的總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA；

2）以步驟1）中的cDNA為模板，分別以MRC-1-F和MRC-1-R、RPL32-F和RPL32-R為引物，進(jìn)行熒光實(shí)時定量PCR反應(yīng)；

3）分析PCR產(chǎn)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，熒光實(shí)時定量PCR反應(yīng)體系為：

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，熒光實(shí)時定量PCR反應(yīng)條件為：在ABI7300熒光實(shí)時定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，熒光實(shí)時定量反應(yīng)程序模板設(shè)置為ddCt?Plate，反應(yīng)循環(huán)參數(shù)設(shè)置為：55℃5min；95℃10min；95℃15s，60℃1min，共40個循環(huán)，采用相對定量2^-△△CT法計(jì)算相對表達(dá)量。

8.含有權(quán)利要求1所述的引物對的用于檢測抗藍(lán)耳病豬品種的試劑盒。