[發(fā)明專利]一種阿旁宮壽組培再生體系建立的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310080649.4
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103125394A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王燕;陳劍平;汪一婷;牟豪杰;呂永平;陳志
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物莖尖培養(yǎng)技術(shù)，主要是一種阿旁宮壽組培再生體系建立的方法。

背景技術(shù)

阿旁宮壽屬百合科十二卷屬（Haworthia）多肉植物,其葉片肥厚多汁，窗面晶瑩透明，并具有城墻紋理，規(guī)整美麗，為優(yōu)良的多肉植物品種。由于其自然繁殖率低，且原產(chǎn)地不在我國，加之人類過度采掘和對其生境的破壞，目前數(shù)量較少、市售價格居高不下，使其推廣受到限制。因此，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行阿房宮壽的快速繁殖，對于保存優(yōu)良種質(zhì)資源、繁殖名優(yōu)珍稀品種具有重要的意義，以實現(xiàn)其規(guī)模化生產(chǎn)以滿足國內(nèi)外市場的需求。植物組織培養(yǎng)方法可以在短期內(nèi)快使植物速繁殖，不僅繁殖速度塊，且因為是無性繁殖可以保持與母株的一致的遺傳性狀。但是，在此之前還沒有關(guān)于建立阿房宮壽組培再生體系的報道，更沒有成功的實例。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種阿旁宮壽組培再生體系建立的方法。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案來完成的。該阿旁宮壽組培再生體系建立的方法主要包括如下步驟：

1）、培養(yǎng)基的配制：

（1）基本培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA4～8mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;

（3）分化培養(yǎng)基：MS+6-BA0.05～0.5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;

（4）增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L;

（5）壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA0.05～0.1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

2）外植體的選取與滅菌：取阿房宮壽的幼嫩花序，將花蕾清洗消毒后備用；

3）愈傷組織的誘導(dǎo)及增殖：將步驟2）消毒處理后的花蕾在無菌條件下接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)1～2個月后誘導(dǎo)出愈傷組織，將愈傷組織轉(zhuǎn)接到新鮮的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)；

4）不定芽的分化及增殖：將步驟3）愈傷組織在無菌條件下轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20～40天后分化出不定芽，將不定芽叢切割成小叢后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上以叢生芽方式增殖；

5）壯苗培養(yǎng)：將步驟4）叢生芽在無菌條件下切割成單株后轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30～50天后其植株直徑可大3～5cm;

6)移栽：將步驟5）壯苗切除根部后清洗并晾干，然后移栽至多肉植物顆粒土基質(zhì)中栽培。

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟1）中，所述的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分具體為：

（1）基本培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA6mg/L+NAA0.5mg/L;

（3）分化培養(yǎng)基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L;

（4）增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L;

（5）壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.05mg/L;

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟2）中，所述的消毒處理是去除花序上閉合花蕾的外包片，再將花蕾連同部分花葶逐個切下，先用濃洗衣粉溶液浸泡20～60min后再用自來水沖洗干凈，然后依次在體積比為70%的酒精和有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液中分別浸泡0.5～1min和4～7min，最后用無菌水沖洗3～5次；

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟3）中，所述消毒處理后的花蕾，先用解剖刀將其基部切傷后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，并使傷口接觸到培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟6）中，所述切除根部的壯苗清洗后置于通風(fēng)避光處3～10天晾至微微皺縮后移栽至多肉植物顆粒土基質(zhì)中栽培。

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟3）中，所述的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)溫度為23±2℃、光照強(qiáng)度為30～60μmol·m^-2·s^-1、光照時間為8～10小時/天；

進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟4）、5）中，所述的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)溫度為23±2℃、光照強(qiáng)度為80～120μmol·m^-2·s^-1、光照時間為8～12小時/天；