[發明專利]一株穩定高產2,3-丁二醇的細菌及利用低溫等離子體和硫酸二乙酯復合誘變的方法

有效

• 申請號: 201310080237.0
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN103275886A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 戴建英;程小龍;修志龍
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12N13/00;C12R1/01
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 梅洪玉

1.一株穩定高產2,3-丁二醇的細菌，其分類命名為Enterobacter?cloacae?DLM，其保藏號為：CGMCC6053。

2.使用低溫等離子體和硫酸二乙酯復合誘變權利要求1所述的細菌的方法，其特征在于：

（1）將原始菌株進行硫酸二乙酯預處理：將菌種以1-2%接種量接入種子培養基中，培養12-16h后，取菌液離心，棄上清液，殘留菌體用無菌生理鹽水稀釋至細胞個數為10⁷-10⁹/mL；向菌懸液中加入1～3%（v/v）的硫酸二乙酯進行振蕩混合，處理時間為3-10min；

（2）復合誘變菌株：采用介質阻擋放電（DBD）裝置，取500uL處理過的菌懸液滴加到直徑60mm的滅菌冷卻后玻璃圓盤的中央，置于等離子體誘變平臺中；調節玻璃圓盤上部的高壓電極與菌液液面的間隙，調節電流和電壓，使氣體產生放電，得到均勻的空氣介質阻擋放電等離子體，放電處理15-160s；將此菌懸液稀釋涂于平板培養基上，將平板置于25～37°C恒溫培養箱培養，培養時間為1～2天；

（3）菌種篩選：挑取在平板上生長良好的菌落依次進行種子培養基搖瓶初篩、發酵培養基搖瓶復篩，獲得產物濃度明顯提高的突變菌株，然后進行發酵罐培養驗證其發酵性能；通過搖瓶傳代，比較不同代菌株的發酵罐培養實驗結果，驗證其遺傳穩定性。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，發酵使用的培養基包括如下成分：碳源2-14%、氮源0.5-3%、無機鹽0.2-0.5%，其余為水；其中碳源為葡萄糖、淀粉水解液、菊粉水解液中一種或兩種及以上的混合；所述氮源為無機或有機氮化合物，其中無機氮源為磷酸氫二銨和尿素中一種或兩種的混合，有機氮源為酵母粉和玉米漿中一種或兩種的混合；所述無機鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、磷酸鹽、檸檬酸、亞鐵、錳、鋅和EDTA。