[發(fā)明專利]多對(duì)二硫鍵定點(diǎn)環(huán)化固相合成多肽新工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310079963.0
• 申請(qǐng)日: 2013-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN103214550A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王錫平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州強(qiáng)耀生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/06
• 分類號(hào): C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種多對(duì)二硫鍵定點(diǎn)環(huán)化固相合成多肽新工藝，所述的新工藝亦稱樹脂上氧化工藝，其特征在于，所述的新工藝按如下具體步驟如下：

第一步，由于需要多對(duì)二硫鍵，所以適宜的多肽序列含有四個(gè)以上半胱氨酸殘基，將要配對(duì)的半胱氨酸殘基進(jìn)行編號(hào)；

第二步，將配對(duì)的半胱氨酸殘基選擇一對(duì)用單保護(hù)的半胱氨酸，一對(duì)用H-Cys(Acm)-OH，一對(duì)用H-Cys(MMT)-OH；

第三步，應(yīng)用多肽固相合成技術(shù)將多肽序列固定在固相載體上，其中對(duì)應(yīng)的半胱氨酸殘基采用單保護(hù)或者用H-Cys(Acm)-OH或者用H-Cys(MMT)-OH；

第四步，序列合成完成后，將樹脂載體浸泡在有機(jī)溶劑中，然后添加氧化劑，將序列中兩個(gè)單保護(hù)的半胱氨酸殘基的-SH氧化，形成二硫鍵；

第五步，用砂芯濾柱過濾掉溶劑，用純DCM和DMF清洗樹脂；

第六步，將樹脂加入含有1％的脫除劑的有機(jī)溶劑的容器中，對(duì)其中兩個(gè)半胱氨酸殘基保護(hù)基的特異性去除；

第七步，用砂芯濾柱過濾溶劑，用ELLMAN試劑檢測(cè)，用純DCM和DMF清洗樹脂；

第八步，將樹脂載體浸泡在有機(jī)溶劑中，添加氧化劑，將已去除-HS保護(hù)基的兩個(gè)半胱氨酸殘基的-SH氧化，形成二硫鍵；

第九步，用砂芯濾柱過濾掉溶劑，用純DCM和DMF清洗樹脂；

第十步，用ELLMAN試劑檢測(cè)，查看反應(yīng)是否完全，對(duì)比本發(fā)明和常規(guī)工藝的兩對(duì)二硫鍵氧化肽合成的優(yōu)劣。