[發(fā)明專利]用于分離純化羊泰勒蟲裂殖子的免疫親和層析柱及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310079950.3
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103143332A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 殷宏;羅建勛;李有全;張曉;劉志杰;陳澤;楊吉飛;關(guān)貴全;任巧云;劉愛紅;牛慶麗;劉軍龍;馬米玲;岑雙慶;何海寧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: B01J20/291
• 分類號: B01J20/291;B01J20/30;B01D15/00;C12N1/10;C12R1/90
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛

1.一種用于分離純化羊泰勒蟲裂殖子的免疫親和層析柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）抗體的純化：

利用protein?G層析柱純化血清抗體：將填料與結(jié)合緩沖液按照1:1體積比例預(yù)混后緩慢裝入層析柱中，待填料充分沉淀后按照流速1?ml/min加5?ml結(jié)合緩沖液來平衡，將染蟲綿羊血清按照流速1?ml/min加入到制好的層析柱中，收集流出液；用30?ml結(jié)合緩沖液按照流速2?ml/min過柱，待完全清洗后，用10-15?ml洗脫緩沖液按照流速1?ml/min過柱，收集流出液，SDS-PAGE驗(yàn)證純化效果；用平衡緩沖液平衡柱子，以備下次使用；

所述結(jié)合緩沖液：20?mmol/L磷酸氫二鈉，0.15?mol/L?氯化鈉，pH?8.0；

所述洗脫緩沖液A：0.1?mol/L?甘氨酸，pH?2.5；

所述平衡緩沖液：?1?mol/L?Tris-HCl，pH?8.5；

（2）抗體的上樣前處理：

用20?ml偶聯(lián)緩沖液清洗脫鹽柱，加入3?ml純化的IgG過柱脫鹽，收集流出液，將1/10流出液質(zhì)量的氧化劑偏高碘酸鈉固體粉末加入到樣品中進(jìn)行氧化處理，室溫振蕩1?h，立即再次進(jìn)行脫鹽處理；所述脫鹽柱：聚丙酰胺凝膠介質(zhì)；

（3）抗體的偶聯(lián)：

吸取2?ml?Affi-Gel凝膠至15?ml管中，完全沉淀后移除上清液，加10?ml偶聯(lián)緩沖液，混合均勻，待凝膠完全沉淀后，移除上清液，重復(fù)上述清洗過程；清洗完成后，再次加入5?ml偶聯(lián)緩沖液，將其轉(zhuǎn)移至偶聯(lián)柱中；加抗體至偶聯(lián)柱中，室溫振蕩偶聯(lián)24?h，收集流出液檢測偶聯(lián)率；用1倍柱容量的PBS清洗偶聯(lián)柱，將偶聯(lián)完成的偶聯(lián)柱放入4℃保存?zhèn)溆茫凰雠悸?lián)緩沖液：100?mmol/L?醋酸鈉、100?mmol/L?氯化鈉，pH?5.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法制備得到的用于分離純化羊泰勒蟲裂殖子的免疫親和層析柱。