[發明專利]一種同時檢測多種黃曲霉毒素傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201310079759.9
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN103196984A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 杜斌;魏琴;黎榮霞;于海琴;張勇;吳丹;李賀;馬洪敏
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物傳感、納米功能材料及食品安全分析技術領域，具體是涉及一種同時檢測多種黃曲霉毒素傳感器的制備方法及應用。

背景技術

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產物，產生的黃曲霉毒素主要有黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2（簡稱4種黃曲霉毒素），普遍存在于霉變的糧食及糧食制品中，可通過多種途徑污染食品和飼料，直接或間接進入人類食物鏈，威脅人類健康和生命安全。

黃曲霉毒素是到目前為止所發現的毒性最大的真菌毒素，其毒性相當于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，長期攝入黃曲霉毒素會誘發肝癌，它誘發肝癌的能力比二甲基亞硝胺大75倍，是目前公認的致癌性最強的物質之一。

在發展中國家食用被黃曲霉毒素污染的食物與癌癥的發病率呈正相關性，亞洲和非洲的疾病研究機構的研究工作表明，食物中黃曲霉毒素與肝細胞癌變呈正相關性，長時間食用含低濃度黃曲霉毒素的食物是導致肝癌、胃癌和腸癌等疾病的主要原因。

國家衛生部門禁止企業使用被黃曲霉毒素嚴重污染的糧食進行食品加工生產，并制定相關的標準監督企業執行，但對于含黃曲霉毒素濃度較低的糧食和食品無法進行控制。

因此開發出一種能同時快速靈敏檢測食品中多種微量黃曲霉毒素的多通道印刷電極具有十分重要的意義。

石墨烯，是已知材料中最薄的一種，且非常牢固堅硬；作為單質，它在室溫下傳遞電子的速度比已知導體都快，它具有超薄、強韌、穩定、導電性好等諸多現有材料無法比擬的優點。氮原子摻雜石墨烯，可改變材料性能。拉曼光譜表明，氮摻雜改變了石墨烯薄片的電子特性，但不會干擾它的基本結構。氮原子放在平面石墨烯片內，每個氮原子鍵合三個相鄰的碳，即每個氮原子取代薄片上的一個碳，可以制得高品質石墨烯，將其用于傳感器的制備，使傳感器的靈敏度和穩定性得到顯著提高，改善了傳感器的性能。

殼聚糖在傳感器的自組裝過程中起到了非常好的作用，羥丙基殼聚糖是由殼聚糖改性而成的一種水溶性良好的殼聚糖衍生物，它既能溶于水又能溶于乙醇等有機溶劑，具有良好的乳化性、抗菌性、吸濕保濕性和表面活性，其吸濕保濕能力與透明質酸相當，乳化性和泡沫性與非離子表面活性劑Tween60相當，其在傳感器中的效果優于殼聚糖。

目前測定黃曲霉毒素的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯免疫吸附測定法、質譜法、放射免疫測定法。存在以下不足：

（1）檢測過程煩瑣、耗時長，勞動強度大；

（2）儀器設備昂貴、操作復雜，難以實現快速分析；

（3）靈敏度較差，且不能實現多種黃曲霉毒素的同時檢測。

針對上述不足，本發明提供一種操作方便、便攜、成本低、快速靈敏檢測食品中多種黃曲霉毒素的印刷電極電化學免疫傳感器。

發明內容

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1.?一種同時檢測多種黃曲霉毒素傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）在一個涂覆一層聚酯薄膜的矩形基片表面上，依次以銀漿印刷1個參比電極，以導電碳漿印刷5個工作電極、1個對電極、7個電極引出線及引出線端部，并在所有電極及引出線端部以外的基片上，以絕緣漿印刷一層絕緣層，并在電極區域形成一個圓形電解池凹槽⑦，制得五通道絲網印刷電極；

（2）在（1）所述的五通道絲網印刷電極的5個工作電極上，滴涂5?~?10μL銀納米粒子—氮摻雜石墨烯—羥丙基殼聚糖的導電復合納米材料溶液；所述導電復合納米材料溶液，是將銀納米粒子與氮摻雜石墨烯按照一定的質量比進行混合超聲分散30min，然后加上質量分數1.0%的羥丙基殼聚糖溶液超聲混合30min，制成質量比為（1?~?5）:（8?~?12）:（1~?10）的銀納米粒子—氮摻雜石墨烯—羥丙基殼聚糖導電復合納米材料溶液；所述羥丙基殼聚糖溶液，將1?g?羥丙基殼聚糖加入到99?mL?水中攪拌2?h，制得質量分數1.0%的羥丙基殼聚糖溶液。

（3）在步驟（2）制得的5個工作電極上分別滴加5?~?10μL的黃曲霉毒素B1抗體、黃曲霉毒素B2抗體、黃曲霉毒素G1抗體、黃曲霉毒素G2抗體及總黃曲霉毒素抗體，再以10μL，質量分數為1%的牛血清白蛋白封閉電極上的非特異性活性位點，制得一種同時檢測多種黃曲霉毒素傳感器，置于4?℃下保存備用，所述抗體濃度均5?~?10?μg/mL。

2.?一種同時檢測多種黃曲霉毒素的方法，該方法包括以下步驟：