[發明專利]用于檢測磺胺二甲基嘧啶和恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201310078523.3
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103197069A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 沈建忠;王戰輝;蔣文曉;史為民;江海洋;張素霞;丁雙陽;曹興元;李建成
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種檢測磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒及其應用。

背景技術

磺胺二甲基嘧啶是通過人工合成的氨苯磺胺衍生物，主要用于預防和治療細菌感染性疾病。磺胺二甲基嘧啶能抑制革蘭氏陽性菌及一些陰性菌，可以治療多種細菌感染，在獸醫臨床上廣泛應用于治療由敏感細菌感染的各種畜禽疾病。

由于磺胺二甲基嘧啶在體內的作用和代謝時間較長，通過任何途徑攝入的磺胺都有可能在人體內蓄積。蓄積濃度超過一定值時，就會對人體造成損害。短時間大劑量或長時間小劑量的刺激可分別引起急性或慢性中毒，影響機體的泌尿、免疫系統，破壞肌肉、腎臟和甲狀腺等組織，如誘發人的甲狀腺癌等。另外，人體內長期存在磺胺會導致許多細菌對磺胺類藥物產生抗藥性。因此，國際食品法典委員會（CAC）和許多國家規定，食品中磺胺類總量的最大殘留限量（MRL）為0.1mg/kg。

恩諾沙星，是氟喹酮類抗菌藥，因其抗菌廣譜、抗菌作用強、口服吸收好、體內分布廣，現已成為畜禽業和水產養殖業中最重要的抗菌類藥物之一，被大量用于治療、預防和促生長。本品為廣譜殺菌藥，對支原體有特效。對大腸桿菌、克雷白桿菌、沙門氏菌、變形桿菌、綠膿桿菌、嗜血桿菌、多殺性巴氏桿菌、溶血性巴氏桿菌、金葡菌、鏈球菌等都有殺菌效用。恩諾沙星可作為動物用藥品，在動物體內的半衰期長，有良好的組織分布性，屬于廣效性抑菌劑，對于革蘭氏陽性菌、陰性菌及霉漿體具有抑菌作用，曾被使用于養殖魚類之弧菌癥及大腸桿菌癥疾病之控制。由于其耐藥性和潛在的致癌性，歐盟及我國均制定了在組織中的最高殘留限量（100μg/kg）。

目前，檢測磺胺二甲基嘧啶和恩諾沙星的化學方法有高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法，但由于復雜的儀器設備和繁瑣的過程，不適合現場監控和大量樣本篩查。

目前尚未有商品化的用于同時檢測磺胺二甲基嘧啶和恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒及其應用。

本發明所提供的檢測磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒，具體可包括抗體1、抗體2、包被原1、包被原2、酶標記物1和酶標記物2；所述抗體1為抗磺胺二甲基嘧啶的抗體，所述抗體2為抗恩諾沙星的抗體，所述包被原1為磺胺二甲基嘧啶半抗原與載體蛋白的偶聯物，所述包被原2為恩諾沙星半抗原與載體蛋白的偶聯物，所述酶標記物1為抗所述抗體1的酶標二抗，所述酶標記物2為抗所述抗體2的酶標二抗。

在本發明中，所述磺胺二甲基嘧啶半抗原具體為磺胺二甲基嘧啶；所述恩諾沙星半抗原具體為恩諾沙星。

所述酶聯免疫試劑盒還包括如下中的至少一種：磺胺二甲基嘧啶標準溶液、恩諾沙星標準溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、包被緩沖液、封閉液和樣品稀釋液。

在本發明的一個實施例中，所述酶聯免疫試劑盒具體由所述抗體1、所述抗體2、所述包被原1、所述包被原2、所述酶標記物1、所述酶標記物2、所述磺胺二甲基嘧啶標準溶液、所述恩諾沙星標準溶液、所述底物顯色液、所述終止液、所述洗滌液、所述包被緩沖液、所述封閉液和所述樣品稀釋液組成。

在所述酶聯免疫試劑盒中，所述抗磺胺二甲基嘧啶的抗體可為抗磺胺二甲基嘧啶的單克隆抗體，也可為抗磺胺二甲基嘧啶的多克隆抗體。在本發明的一個實施例中，所述抗磺胺二甲基嘧啶的抗體為抗磺胺二甲基嘧啶的單克隆抗體，具體由磺胺類單克隆抗體雜交瘤細胞株SAs?CGMCC?No.3393產生。所述抗恩諾沙星的抗體可為抗恩諾沙星的多克隆抗體，也可為抗恩諾沙星的單克隆抗體。在本發明的一個實施例中，所述抗恩諾沙星的抗體為抗恩諾沙星的多克隆抗體，具體是用恩諾沙星半抗原與載體蛋白的偶聯物作為免疫原免疫脊椎動物（如新西蘭大白兔）得到的。

在所述酶聯免疫試劑盒中，所述磺胺二甲基嘧啶標準溶液和所述恩諾沙星標準溶液可以是一定濃度范圍內的多種濃度的標準溶液，例如可以在0～100μg/L之間，如濃度分別為0.01μg/L、0.05μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L、24.3μg/L和72.9μg/L。

在所述酶聯免疫試劑盒中，所述載體蛋白可為人血清白蛋白（HSA）、卵清白蛋白（OVA）、血藍蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）、鼠血清蛋白（MSA）、甲狀腺蛋白（BCG）或兔血清蛋白（RSA）。在本發明中，與所述磺胺二甲基嘧啶半抗原偶聯的載體蛋白具體為人血清白蛋白（HSA），與所述恩諾沙星半抗原偶聯的載體蛋白具體為卵清白蛋白（OVA）。