[發明專利]用于檢測磺胺二甲基嘧啶和恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201310078523.3
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103197069A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 沈建忠;王戰輝;蔣文曉;史為民;江海洋;張素霞;丁雙陽;曹興元;李建成
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星的酶聯免疫試劑盒，包括抗體1、抗體2、包被原1、包被原2、酶標記物1和酶標記物2；所述抗體1為抗磺胺二甲基嘧啶的抗體，所述抗體2為抗恩諾沙星的抗體，所述包被原1為磺胺二甲基嘧啶半抗原與載體蛋白的偶聯物，所述包被原2為恩諾沙星半抗原與載體蛋白的偶聯物，所述酶標記物1為抗所述抗體1的酶標二抗，所述酶標記物2為抗所述抗體2的酶標二抗。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶聯免疫試劑盒還包括如下中的至少一種：磺胺二甲基嘧啶標準溶液、恩諾沙星標準溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、包被緩沖液、封閉液和樣品稀釋液。

3.根據權利要求1或2所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述抗磺胺二甲基嘧啶的抗體為抗磺胺二甲基嘧啶的單克隆抗體，由磺胺類單克隆抗體雜交瘤細胞株SAs?CGMCC?No.3393產生；或

所述抗恩諾沙星的抗體為抗恩諾沙星的多克隆抗體。

4.根據權利要求1-3中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述載體蛋白為人血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白、牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白或兔血清蛋白。

5.根據權利要求1-4中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶標記物的標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶；或

所述底物顯色液由A液和B液組成；所述A液為過氧化脲或過氧化氫，所述B液為四甲基聯苯胺或鄰苯二胺；所述終止液為硫酸；或

所述底物顯色液為對硝基苯磷酸酯溶液。

6.根據權利要求2-5中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述洗滌液為pH7.4、含有吐溫20的0.02M的磷酸鹽緩沖液；所述吐溫20在所述洗滌液中的體積含量為0.05％；或

所述包被緩沖液為pH9.6、0.05mol/L的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液；

所述封閉液為pH7.4，含小牛血清、蔗糖和酪蛋白的磷酸鹽緩沖液；所述小牛血清在所述封閉液中的體積含量為0.5％，所述蔗糖在所述封閉液中的含量為每100ml所述封閉液中含有5g所述疊氮化鈉，所述酪蛋白在所述封閉液中的含量為每100ml所述封閉液中含有1g所述酪蛋白；

所述樣品稀釋液為0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液。

7.權利要求1-6中任一所述的酶聯免疫試劑盒的制備方法，包括如下（1）或（2）的步驟：

（1）將所述抗體1、所述抗體2、所述包被原1、所述包被原2、所述酶標記物1和所述酶標記物2分別單獨包裝的步驟；

（2）將所述抗體1、所述抗體2、所述包被原1、所述包被原2、所述酶標記物1、所述酶標記物2、所述磺胺二甲基嘧啶標準溶液、所述恩諾沙星標準溶液、所述底物顯色液、所述終止液、所述洗滌液、所述包被緩沖液和所述封閉液分別單獨包裝的步驟。

8.檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星的方法，是利用權利要求1-6中任一所述的酶聯免疫試劑盒檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有磺胺二甲基嘧啶和/或恩諾沙星。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述酶聯免疫試劑盒中的包被原為權利要求1-6中任一中所述的包被原1和所述包被原2的混合物；所述酶聯免疫試劑盒中的抗體為權利要求1-6中任一中所述的抗體1和所述抗體2的混合物；所述酶聯免疫試劑盒中的酶標記物為權利要求1-6中任一中所述的酶標記物1和所述酶標記物2的混合物。

10.磺胺類單克隆抗體雜交瘤細胞株SAs，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.3393；或

由所述磺胺類單克隆抗體雜交瘤細胞株SAs?CGMCC?No.3393產生的單克隆抗體。