[發(fā)明專利]流蘇花總黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310077294.3
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103169727A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧瑞雪;劉普;尹衛(wèi)平;盧宗元;王怡冉;牛亞琪;柴元武;時(shí)清亮
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: A61K31/7048
• 分類號: A61K31/7048;A61P39/06
• 代理公司: 洛陽公信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥有效成分提取分離及應(yīng)用技術(shù)，尤其涉及流蘇花總黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

流蘇為木犀科流蘇樹屬植物，為國家二級保護(hù)植物，又名花木、蘿卜絲花、油根子、牛荊子、四月雪。流蘇主要分布于黃河中下游及其以南地區(qū)[楊玉梅，胡江．流蘇樹的繁殖栽培與園林應(yīng)用[J]．山東林業(yè)科技，2005(1):56]。流蘇為藥食兩用植物，《中國經(jīng)濟(jì)植物志》中記載，木犀科植物流蘇樹的芽、葉具有消暑止渴功效，主治中暑。民間有在春天采流蘇的嫩葉和花，制作茶飲用的歷史，用流蘇花制作的茶稱為“糯米花茶”，清香爽口，別具一番風(fēng)味[胡世才.?優(yōu)良飲料植物-流蘇樹及其枝葉泡制法[J]．林業(yè)科技開發(fā)，1991，3:16；房紹坤，杜慶志，鄭冬.?流蘇樹的繁育與應(yīng)用[J]．國土綠化，2005，9:45-46]。流蘇“糯米花茶”根據(jù)史籍記載已有一千多年歷史，陸羽在《茶經(jīng)》曰：“上者生爛石，中者生櫟壤，下者生黃土。野者上，園者次”?！芭疵谆ú琛碧烊簧L，內(nèi)含對人體健康有益物豐富，維生素、氨基酸、兒茶多酚、咖啡堿、茶丹寧含量均較高，飲用此茶可消積食、清內(nèi)火、殺菌治痢、順氣通絡(luò)、消暑利尿、去膩降壓、消除疲勞、減肥護(hù)膚。茶渣可治胃病和小兒腹瀉，具有藥用價(jià)值。流蘇花作為一種珍貴的民間茶原料正因其特殊的風(fēng)味及功能受到越來越多的關(guān)注。已有研究中明確了流蘇花中含有較多的黃酮類化合物，并證明這些物質(zhì)具有較好的抗氧化作用。但僅僅提取并測定了其中總黃酮類化合物的含量，提取的純度不高，對于如何測定其中具體所含物質(zhì)及組成比例并不明確，總黃酮類化合物的抗衰老和抗氧化作用的效果如何也不明確；且在總黃酮類化合物的制備方法中使用較多的成本較高的有毒溶劑，不僅不利于工業(yè)化生產(chǎn)而且對人體的健康有危害。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供成分明確的流蘇花總黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用，使制備方法經(jīng)濟(jì)簡便，易于工業(yè)化生產(chǎn)，提取得到的流蘇花總黃酮類化合物產(chǎn)品純度高，具體的物質(zhì)組成比例明確，總黃酮類化合物的抗氧化作用效果明確。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種流蘇花總黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟：

（1）乙醇溶液提?。?/p>

將流蘇花藥材干燥、粉碎，加入質(zhì)量濃度為60-80％乙醇浸泡后，加熱回流提取3-5小時(shí)，過濾得到濾液和殘?jiān)賹堅(jiān)再|(zhì)量濃度為60~80％乙醇加熱回流提取2次，每次3-5小時(shí)，合并濾液，將濾液減壓蒸發(fā)濃縮得浸膏；

（2）大孔吸附樹脂柱色譜分離：

將得到的浸膏用質(zhì)量濃度為10-30%乙醇溶解，過濾，將濾液用大孔吸附樹脂進(jìn)行充分吸附，裝柱，依次用體積濃度為10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇-水體系洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇體積濃度為50-60%乙醇-水洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，將浸膏在50-60℃下真空減壓干燥，即得流蘇花總黃酮類化合物粗品；

?（3）硅膠柱色譜分離：

將流蘇花總黃酮類化合物粗品采用硅膠柱色譜上樣分離，依次以CHCl₃：CH₃OH體積比為1:?9，1:?7，1:?5，1:?3為流動(dòng)相梯度洗脫，采用蘆丁作為對照，用紫外光譜測定流蘇花總黃酮類化合物的含量，收集含有流蘇花總黃酮類化合物大于60%的餾分段；

（4）凝膠柱色譜分離：

將硅膠柱色譜分離后的樣品采用凝膠柱色譜分離，采用CHCl₃：CH₃OH體積比為2:?1等度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥；

（5）半制備高效液相色譜純化：

將凝膠柱色譜分離后的樣品采用半制備高效液相色譜純化，收集洗出液，減壓濃縮，干燥得流蘇花總黃酮類化合物，色譜條件為色譜柱ODS-A，20×250mm，流動(dòng)相為CH₃OH：H₂O，體積比為7:3；

（6）高效液相色譜檢測：

最后將純化后的樣品采用高效液相色譜檢測，色譜條件為：

色譜儀：Agilent1100高效液相色譜儀，

色譜柱：Agilent?Zorbax?SB?C₁₈色譜柱，4.6×250?mm，5?μm，

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.4%冰醋酸，體積比為30:?10:?60，

流速：1.0?mL/min，

柱溫：25℃，

檢測波長：350?nm。