[發(fā)明專利]流蘇花總黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310077294.3
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103169727A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧瑞雪;劉普;尹衛(wèi)平;盧宗元;王怡冉;牛亞琪;柴元武;時清亮
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: A61K31/7048
• 分類號: A61K31/7048;A61P39/06
• 代理公司: 洛陽公信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

1.一種流蘇花總黃酮類化合物的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）乙醇溶液提取：

將流蘇花藥材干燥、粉碎，加入質(zhì)量濃度為60-80％乙醇浸泡后，加熱回流提取3-5小時，過濾得到濾液和殘渣，再將殘渣以質(zhì)量濃度為60~80％乙醇加熱回流提取2次，每次3-5小時，合并濾液，將濾液減壓蒸發(fā)濃縮得浸膏；

（2）大孔吸附樹脂柱色譜分離：

將得到的浸膏用質(zhì)量濃度為10-30%乙醇溶解，過濾，將濾液用大孔吸附樹脂進(jìn)行充分吸附，裝柱，依次用體積濃度為10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇-水體系洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇體積濃度為50-60%乙醇-水洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，將浸膏在50-60℃下真空減壓干燥，即得流蘇花總黃酮類化合物粗品；

?（3）硅膠柱色譜分離：

將流蘇花總黃酮類化合物粗品采用硅膠柱色譜上樣分離，依次以CHCl₃：CH₃OH體積比為1:?9，1:?7，1:?5，1:?3為流動相梯度洗脫，采用蘆丁作為對照，用紫外光譜測定流蘇花總黃酮類化合物的含量，收集含有流蘇花總黃酮類化合物大于60%的餾分段；

（4）凝膠柱色譜分離：

將硅膠柱色譜分離后的樣品采用凝膠柱色譜分離，采用CHCl₃：CH₃OH體積比為2:?1等度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥；

（5）半制備高效液相色譜純化：

將凝膠柱色譜分離后的樣品采用半制備高效液相色譜純化，收集洗出液，減壓濃縮，干燥得流蘇花總黃酮類化合物，色譜條件為色譜柱ODS-A，20×250mm，流動相為CH₃OH：H₂O，體積比為7:3；

（6）高效液相色譜檢測：

最后將純化后的樣品采用高效液相色譜檢測，色譜條件為：

色譜儀：Agilent1100高效液相色譜儀，

色譜柱：Agilent?Zorbax?SB?C₁₈色譜柱，4.6×250?mm，5?μm，

流動相：甲醇-乙腈-0.4%冰醋酸，體積比為30:?10:?60，

流速：1.0?mL/min，

柱溫：25℃，

檢測波長：350?nm。

2.如權(quán)利要求1所述的一種流蘇花總黃酮類化合物的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中乙醇浸泡的時間為8-12小時。

3.如權(quán)利要求1所述的一種流蘇花總黃酮類化合物的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中第1次加熱回流時，乙醇的添加量為流蘇花藥材質(zhì)量的10-12倍，第2次和第3次加熱回流時，乙醇的添加量是流蘇花藥材質(zhì)量的8-10倍。

4.如權(quán)利要求1所述的一種流蘇花總黃酮類化合物的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中的大孔吸附樹脂為D101或AB-8型大孔吸附樹脂。

5.由權(quán)利要求1所述方法制備的流蘇花總黃酮類化合物，其特征在于：由槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1-6)-β-D-葡萄糖苷、北美圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、楊梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷5種黃酮化合物組成，質(zhì)量百分含量分別為5-8%、8-12%、3-6%、30-50%和20-30%。

6.一種如權(quán)利要求5所述的流蘇花總黃酮類化合物的用途，其特征在于：所述的流蘇花總黃酮類化合物具有抗氧化活性，具有清除超氧陰離子自由基、DPPH自由基、羥基自由基和抗脂質(zhì)體過氧化的用途。