[發明專利]一種調控干細胞體外三維定向分化的方法

在審

• 申請號: 201310076323.4
• 申請日: 2013-03-11
• 公開（公告）號: CN104046587A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 馬小軍;劉洋;王淑君;孫廣煒
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/077;C12N5/079;C12N11/10
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種調控干細胞體外三維定向分化的方法，其特征在于：將干細胞包埋在含有硫酸軟骨素的海藻酸鈣微膠珠中，添加誘導分化培養液，通過改變制備微膠珠時海藻酸鈉和硫酸軟骨素的質量比調控干細胞體外定向分化，并且在分化結束后，可利用檸檬酸鈉溶液溶解海藻酸鈣微膠珠，進而得到純凈的分化細胞。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述干細胞包括胚胎干細胞、iPS細胞、間充質干細胞、神經干細胞、虹膜色素上皮細胞、羊膜上皮細胞、或造血干細胞。

3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述含有硫酸軟骨素的海藻酸鈣微膠珠為由含海藻酸鈉和硫酸軟骨素的溶液經過鈣液鈣化所制備，此溶液溶劑為生理鹽水；采用海藻酸鈉濃度為0.3-4%(W/V)，采用硫酸軟骨素溶液濃度為0.5-10%(W/V)，海藻酸鈉和硫酸軟骨素的質量比為1-20；

含有硫酸軟骨素的海藻酸鈣微膠珠直徑為200-2000μm；

海藻酸鈉的分子量為100-1000kDa，古羅糖醛酸和甘露糖醛酸比例（GM比）范圍為0.2-3，且海藻酸鈉為未修飾海藻酸鈉、精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸（RGD）修飾海藻酸鈉、異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸（IKVAV）修飾海藻酸鈉、酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-絲氨酸-精氨酸（YIGSR）修飾海藻酸鈉中一種或二種以上的海藻酸鈉；

硫酸軟骨素平均分子量為2-40kDa。

4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述定向分化包括干細胞向神經、心肌、肝、胰島、成骨、軟骨或脂肪細胞定向分化。

5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述定向分化所使用的培養容器為靜態培養體系或生物反應器；

靜態培養體系指使用培養瓶、培養板、培養皿、或培養袋培養；

生物反應器包括旋轉式反應器、灌注式反應器、攪拌式反應器、或氣升式反應器。