[發明專利]一種營養繁殖花卉水仙超低溫保存及植株再生方法

無效

• 申請號: 201310076087.6
• 申請日: 2013-03-11
• 公開（公告）號: CN103141473A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 林田;楊華;龍萍;朱天生;劉灶長;李天菲;羅利軍
• 申請（專利權）人: 上海市農業生物基因中心
• 主分類號: A01N3/02
• 分類號: A01N3/02;A01H4/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

1.一種營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法，其特征在于，????

所述超低溫保存的方法包含步驟有：將營養繁殖花卉的鱗莖進行誘導，切取大小2~5mm的莖尖，將帶有根原基和芽原基的莖尖進行預培養，然后置于預處理溶液中在室溫下處理15～30min，將在預處理溶液中處理過的莖尖轉入玻璃化保護劑中進行冰浴處理60～120min，將冰浴處理的莖尖轉移至裝有預冷過的新鮮玻璃化保護劑的冷凍管中，然后將冷凍管迅速投入到液氮中保存。

2.根據權利要求1所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法，

其特征在于，所述的營養繁殖花卉為崇明水仙。

3.根據權利要求1或2所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述誘導包含的步驟有：選取3～4年生崇明水仙鱗莖，然后將水仙鱗莖用70%酒精消毒1?min，0.1%的升汞消毒10~20min，再用無菌水沖洗，沖洗后將鱗莖切塊接種于含1?mg·L^-1?BA及1?mg·L^-1?NAA的MS培養基上誘導出小鱗莖。

4.根據權利要求3所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述MS培養基上誘導的培養溫度為23～27℃,?光照12?h·d^-1，光照強度36?μmol?m^-2?s^-1，繼代為3個月。

5.根據權利要求1所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述預培養是指將誘導后的莖尖接種到含0.3~0.5?mol·L^-1蔗糖的MS培養基內在25℃下培養1~5天。

6.根據權利要求1所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述預處理溶液為2?mol·L^-1甘油和0.4?mol·L^-1蔗糖的MS液體培養基。

7.根據權利要求1所述的營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述玻璃化保護劑為3.26?mol·L^-1甘油、?2.42?mol·L^-1乙二醇、1.9?mol·L^-1?DMSO和0.4?mol·L^-1蔗糖。

8.一種營養繁殖花卉水仙的超低溫保存及植株再生的方法,其特征在于，所述植株再生的方法包括如下步驟：取權利要求1~7所述帶有保存后莖尖的冷凍管立即放入40℃水浴中快速解凍2～4?min，將解凍后的莖尖在室溫下用含1.2?mol·L^-1蔗糖的MS培養液洗滌2～3次，洗滌時間為每次5～10?min，將洗滌后的莖尖用濾紙吸干，將吸干的莖尖轉移至含1?mg·L-1?BA、?0.5?mg·L-1?NAA和?0.5?mg·L-1?GA3的MS半固體培養基中進行暗光或弱光培養5~7?天，然后轉入含1?mg·L-1?BA和1?mg·L-1?NAA的MS固體培養基中培養。