[發明專利]馬尾松和濕地松快速分子檢測方法及其特異性引物對無效
| 申請號： | 201310076041.4 | 申請日： | 2013-03-11 |
| 公開（公告）號： | CN103173546A | 公開（公告）日： | 2013-06-26 |
| 發明（設計）人： | 賈婕;馮源恒;楊章旗;黃永利;黃雪芬 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區林業科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104 | 代理人： | 楊立華 |
| 地址： | 530002 廣*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 馬尾松 濕地松 快速 分子 檢測 方法 及其 特異性 引物 | ||
1.一種馬尾松和濕地松快速分子檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
<1>DNA提取
采用改進的CTAB裂解-硅珠吸附法提取樣品DNA；
<2>PCR擴增
用步驟<1>的樣品DNA進行PCR擴增，
PCR反應體系：共10μL，包括模板DNA1.2μL、10×Buffer1μL、2mM-dNTP0.2μL、25mu-MgCl21.1μL、r-Taq0.1μL、F-primer0.25μL、R-primer0.25μL、ddH2O5.9μL；
PCR反應程序：預變性94℃4min；梯度降溫擴增16循環，第一次94℃15s，60℃15s，72℃30s，此后每個循環退火溫度均比前一個循環低0.5℃；一般性擴增15循環94℃15s，52℃15s，72℃30s；延伸72℃20min；最終保存4℃；
<3>凝膠電泳
將步驟<2>的PCR產物在8%的聚丙烯酰胺凝膠上電泳，然后銀染檢測。
2.根據權利要求1所述的馬尾松和濕地松快速分子檢測方法，其特征在于：
所述F-primer是引物PJ164L：CGTCGGTGAATCAGCAGC；
所述R-primer是引物PJ164R：GATAAGCGAGTGGGAAGTA。
3.根據權利要求1所述馬尾松和濕地松快速分子檢測方法的特異性引物對，其特征在于
該引物對為PJ164L/R，具有以下序列：
引物PJ164L：CGTCGGTGAATCAGCAGC；
引物PJ164R：GATAAGCGAGTGGGAAGTA。
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