[發明專利]一種基于液相芯片檢測痰液microRNAs用于早期肺癌診斷的方法

無效

• 申請號: 201310075587.8
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103305602A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 李富榮;王正;余小舫;齊暉;費筠
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫用診斷技術領域，具體涉及肺癌特異性microRNAs的篩選，針對肺癌特異性microRNAs的液相芯片檢測體系的建立和優化，及其在早期肺癌篩查和診斷中的應用。?

背景技術

肺癌是全世界各地常見的惡性腫瘤之一，其死亡率呈逐年上升趨勢。對高危人群的篩查和早期診斷可以有效降低死亡率，但現在并沒有理想的無創篩查方法。microRNAs(miRNAs)是在基因表達調控中發揮廣泛作用的非編碼小分子RNA，在腫瘤形成的過程中往往有異常表達，而特殊的miRNAs表達譜可區分不同類型的癌癥。通過既往的研究發現，排泄物中的miRNAs可作為一種非常有潛質的無創腫瘤標志物，因此痰液中的的miRNAs對肺癌高危人群篩查有著重要的價值。?

2010年，Xie?et?al發現miR-21在非小細胞肺癌(Non?Small?Cell?Lung?Cancer，NSCLC)患者痰液中的含量比正常人明顯增高，痰細胞學檢查陽性患者的痰液中miR-21全部呈高表達，有一半痰細胞學檢查陰性患者的痰液中miR-21呈高表達，且miR-21在早期肺癌中就有較高的水平(Xie?Y，Todd?NW，Liu?Z，et?al.Altered?miRNA?expression?in?sputum?for?diagnosis?of?non-small?cell?lung?cancer.Lung?Cancer，2010，67(2)：170-176.)。隨后Yu?et?al取肺腺癌的組織標本和正常組織標本進行對比，發現有7種miRNAs在兩者間存在明顯差異，其中4種(miR-21、miR-182、miR-375和miR-200b)在癌組織中表達升高，3種(miR-486、miR-126和miR-145)在癌組織中表達降低。然后分析這7種miRNAs在36例I期肺腺癌患?者和對照組痰液中的含量，發現它們在痰液中的變化與組織中的一致。通過對數據的分析發現其中miR-21、miR-486、miR-375、miR-200b聯合診斷肺腺癌的價值最高，靈敏度和特異性分別為80.6％和91.7％。再另選一組獨立樣本對這4種miRNAs進行研究，發現它們在不同的腫瘤組織類型中診斷價值不同，它們聯合診斷的靈敏度和特異性在腺癌中為80.6％和92.5％，鱗癌中為64.1％和71.3％；周圍型肺癌為78.3％和93.8％，中央型肺癌為65.8％和70.9％，不過在I、II、III、IV期肺癌中則無明顯差異(Yu?L，Todd?NW，Xing?L，et?al.Early?detection?of?lung?adenocarcinoma?in?sputum?by?a?panel?of?microRNA?markers.Int?J?Cancer，2010，127(12)：2870-2878.)。與上述的實驗方法和步驟一致，Xing?et?al證實肺鱗癌組織中miR-205，miR-210和miR-708表達增高，miR-126、miR-139和miR-429表達減少，其中miR-205、miR-210和miR-708的聯合診斷價值最高，其靈敏度和特異性分別為73％和96％，它們在I期肺鱗癌中的表達量就很高，且其表達水平不隨肺癌的進展而變化(Xing?L，Todd?NW，Yu?L，et?al.Early?detection?of?squamous?cell?lung?cancer?in?sputum?by?a?panel?of?microRNA?markers.Mod?Pathol，2010，23(8)：1157-1164.)。?

2012年，Roa?et?al^[34]等利用RT-PCR檢測加聚類分析法篩選到一個檢測痰液miRNAs最優組合方案(miR-21，miR-143，miR-155，miR-210，miR-372)，早期診斷NSCLC的靈敏度和特異性達到83.3％和100％(Roa?WH，Kim?JO，Razzak?R，etal.Sputum?MicroRNA?Profiling：A?Novel?Approach?for?the?Early?Detection?of?Non-Small?Cell?Lung?Cancer.Clin?Invest?Med，2012，35(5)：E271.)。?

發明專利申請公開書(公開號：US?2008/0182237；國別：美國；公開日：2008年7月31日)描述了跟肺癌相關的多核苷酸，包括miRNAs，miRNAs前體以及相關的核酸，及其應用在肺癌的診斷、預后和治療中的技術，確定疾病相關多核?苷酸作用機制的方法和對靶核酸進行線性擴增和標記的方法。?