[發(fā)明專利]一種基于液相芯片檢測(cè)痰液microRNAs用于早期肺癌診斷的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310075587.8
• 申請(qǐng)日: 2013-03-08
• 公開（公告）號(hào): CN103305602A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李富榮;王正;余小舫;齊暉;費(fèi)筠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于液相芯片系統(tǒng)進(jìn)行早期診斷肺癌的方法，其特征在于包括以下步驟：?

①選取肺癌特異性miRNAs和內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)嵌合探針序列，探針5’末端進(jìn)行生物素修飾，探針序列如下：?

miR-21：?

5’-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUACTTTAATCTCAATCAATACAAATC-3’?

miR-155：?

5’-ACCCCUAUCACGAUUAGCAUUAATACACTTTATCAAATCTTACAATC-3’?

miR-205：?

5’-CAGACUCCGGUGGAAUGAAGGAATACTTCATTCATTCATCAATTCA-3’?

miR-125b：?

5’-UCACAAGUUAGGGUCUCAGGGACAATTCATTTACCAATTTACCAAT-3’?

miR-708：?

5’-CCCAGCUAGAUUGUAAGCUCCUUCTACTATACATCTTACTATACTTT-3’?

miR-210：?

5’-UCAGCCGCUGUCACACGCACAGTCAATCAATTACTTACTCAAATAC-3’?

miR-200b：?

5’-UCAUCAUUACCAGGCAGUAUUAATTATTCACTTCAAACTAATCTAC-3’?

miR-106a：?

5’-CUACCUGCACUGUAAGCACUUUUCTTCTCATTAACTTACTTCATAAT-3’?

miR-126：?

5’-CGCAUUAUUACUCACGGUACGACTATCTTCATATTTCACTATAAAC-3’?

miR-486-5p：?

5’-CUCGGGGCAGCUCAGUACAGGATCATTTCACAATTCAATTACTCAA-3’?

miR-191：?

5’-CAGCUGCUUUUGGGAUUCCGUUGTCATCAATCTTTCAATTTACTTAC-3’?

miR-103：?

5’-UCAUAGCCCUGUACAAUGCUGCUCAATATACCAATATCATCATTTAC-3?

②液相芯片的制備：根據(jù)檢測(cè)目的將偶聯(lián)好探針的不同熒光編碼微球混合，得到液相芯片。?

③標(biāo)本檢測(cè)：從標(biāo)本中提取總RNA，根據(jù)檢測(cè)目的選擇步驟①中所述的嵌合探針與目的miRNAs進(jìn)行雜交；接著將雜交后產(chǎn)物與步驟②得到的液相芯片再進(jìn)行雜交；再用藻紅蛋白對(duì)雜交產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記，通過(guò)液相芯片檢測(cè)儀讀出檢測(cè)結(jié)果。?

④確定待檢人群是否為患有肺癌的高危人群，其痰液中的miRNAs表達(dá)譜必須含有一個(gè)已經(jīng)確定的miRNAs異常表達(dá)譜以及至少兩種以上其他的腫瘤特異性miRNAs呈陽(yáng)性。?

2.根據(jù)權(quán)利1所述的基于液相芯片系統(tǒng)早期診斷肺癌的方法，其特征在于：所述的偶聯(lián)好探針的熒光編碼微球?yàn)槲⑶颉?

3.根據(jù)權(quán)利1所述的肺癌，其特征在于：包括原位癌以及轉(zhuǎn)移至大腦、乳腺、前列腺等其他組織的繼發(fā)性腫瘤。?

4.根據(jù)權(quán)利1所述的肺癌特異性miRNAs，其特征在于：包括其成熟的miRNAs序列及其發(fā)夾前體序列。?

5.根據(jù)權(quán)利1所述的肺癌特異性miRNAs和確定的miRNAs異常表達(dá)譜，其特征在于：是由統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出。?

6.根據(jù)權(quán)利3所述的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其特征是包括系統(tǒng)聚類分析法。?

7.根據(jù)權(quán)利1所述的肺癌特異性miRNAs，其特征是包括：miR-21、miR-155、?miR-205、miR-125b、miR-708、miR-210、miR-200b、miR-106a、miR-126、miR-486-5p。?

8.根據(jù)權(quán)利1所述的內(nèi)參基因，其特征是包括；miR-191和miR-103。?

9.根據(jù)權(quán)利1所述的已經(jīng)確定的肺癌miRNAs異常表達(dá)譜，其特征是包括：miR-21、miR-155、miR-205、miR-125b。?