[發明專利]應用于水體重金屬檢測的檢測液及其使用方法

有效

• 申請號: 201310074518.5
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103185711A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 劉小龍;楊曉冬;張云;王毅婧;魏達秀
• 申請（專利權）人: 劉小龍;楊曉冬;張云
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 馬明渡

技術領域

本發明涉及水體檢測環境領域，具體涉及一種應用于水體重金屬檢測的檢測液及其使用方法。?

背景技術

目前由于礦產開采、冶煉加工、機械制造以及儀器儀表、有機物合成等工業中的重金屬廢水排放，造成不少由重金屬（如鉛、汞、鎘、鈷等）引起的水環境污染。重金屬廢水是對環境污染最嚴重和對人類危害最大的工業廢水之一，因此鉛、汞、鎘、鈷等離子的濃度也成為了水環境監測的重要指標。通過檢測水體中鉛、汞、鎘、鈷等離子的濃度，從而大致反應出水體的重金屬污染程度。傳統的重金屬監測的標準分析方法主要以分光光度法和原子吸收分光光度法為主，利用被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的特定吸收對該物質進行定性和定量分析。隨時科技技術的不斷進步，國內應用較多的其他方法還有原子吸收法、原子熒光法以及較先進的電感耦合等離子體發射光譜法(ICP-AES)、電感耦合等離子體-質譜法(ICP-MS)等分析方法。針對此類大型設備昂貴，操作復雜、維護量大、成本較高，不易實現現場檢測等弊端。?

發明內容

本發明提供一種用于檢測水體中重金屬含量的檢測液，此檢測液在檢測水體中重金屬離子時具有操作簡單、速度快、靈敏度高、線性范圍寬、使用成本低、能夠實現現場檢測等優點；同時，還提供一種應用上述檢測液的檢測水體重金屬含量的方法。?

為達到上述目的，本發明采用的第一技術方案是：一種應用于水體重金屬檢測的檢測液，所述熒光檢測液包括Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶和熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶；?

所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶通過以下工藝獲得：包括：

將含有Eu³⁺離子的銪穴狀化合物與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第一活化混合液；

將50nM木瓜蛋白酶與所述第一活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯反應形成Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶；

所述熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶通過以下工藝獲得：包括：

將熒光染料XL665或熒光染料d2與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第二活化混合液；

將50nM木瓜蛋白酶與所述第二活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯反應形成熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶；

上述第一技術方案中的進一步改進方案如下：

1.?上述方案中，所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶經透析袋過濾獲得純化后的Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶。

2.?上述方案中，所述XL665修飾的木瓜蛋白酶經透析袋過濾獲得純化后的XL665修飾的木瓜蛋白酶。?

3.?上述方案中，所述偶聯反應的時間為2?h。?

4.?上述方案中，所述偶聯反應的溫度為25℃。?

本發明采用的第二技術方案是：一種應用權利要求1所述檢測液的檢測水體中重金屬含量的使用方法，其特征在于：包括以下步驟：?

步驟1.?將所述檢測液加入待檢測水溶液后經的激發光源激發從而檢測在620nm和665nm波長的熒光發射強度，并計算665nm熒光發射強度與620nm熒光發射強度比值獲得待測液熒光比值；

步驟2.?將待測液熒光比值與標準熒光曲線對比從而獲得待檢測水溶液中重金屬離子的濃度，所述標準熒光曲線為基于若干種已知重金屬濃度的標準溶液和所述熒光檢測液混合后獲得的液熒光比值標定出的熒光曲線。

上述第二技術方案中的進一步改進方案如下：?

1.?上述方案中，所述已知重金屬濃度的標準溶液包括0.1?nM、1?nM?、10?nM、100?nM和1?nM的標準溶液。

2.?上述方案中，所述重金屬包括Hg²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺。?

3.?上述方案中，所述激發光源產生的光源波長為360nm。?

由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點和效果：?