[發(fā)明專利]應(yīng)用于水體重金屬檢測的檢測液及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310074518.5
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103185711A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉小龍;楊曉冬;張云;王毅婧;魏達(dá)秀
• 申請（專利權(quán)）人: 劉小龍;楊曉冬;張云
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 馬明渡

1.一種應(yīng)用于水體重金屬檢測的檢測液，其特征在于：所述熒光檢測液包括Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶和熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶；

所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶通過以下工藝獲得：包括：

將含有Eu³⁺離子的銪穴狀化合物與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第一活化混合液；

將50nM木瓜蛋白酶與所述第一活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯(lián)反應(yīng)形成Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶；

所述熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶通過以下工藝獲得：包括：

將熒光染料XL665或熒光染料d2與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第二活化混合液；

將50nM木瓜蛋白酶與所述第二活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯(lián)反應(yīng)形成熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測液，其特征在于：所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶經(jīng)透析袋過濾獲得純化后的Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測液，其特征在于：所述XL665修飾的木瓜蛋白酶經(jīng)透析袋過濾獲得純化后的XL665修飾的木瓜蛋白酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測液，其特征在于：所述偶聯(lián)反應(yīng)的時間為2?h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測液，其特征在于：所述偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為25℃。

6.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述檢測液的檢測水體中重金屬含量的使用方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1.?將所述檢測液加入待檢測水溶液后經(jīng)的激發(fā)光源激發(fā)從而檢測在620nm和665nm波長的熒光發(fā)射強(qiáng)度，并計算665nm熒光發(fā)射強(qiáng)度與620nm熒光發(fā)射強(qiáng)度比值獲得待測液熒光比值；

步驟2.?將待測液熒光比值與標(biāo)準(zhǔn)熒光曲線對比從而獲得待檢測水溶液中重金屬離子的濃度，所述標(biāo)準(zhǔn)熒光曲線為基于若干種已知重金屬濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和所述熒光檢測液混合后獲得的液熒光比值標(biāo)定出的熒光曲線。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述已知重金屬濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液包括0.1nM、1nM、10nM、100nM和1nM的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述重金屬包括Hg²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述激發(fā)光源產(chǎn)生的光源波長為360nm。