[發明專利]一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310074450.0
• 申請日: 2013-03-10
• 公開（公告）號: CN103109745A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 顧地周;顧川岳;陸爽;姜云天;朱俊義;程廣有;禚玲玲;張學士;王秋爽;付航;潘雨
• 申請（專利權）人: 通化師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 通化旺維專利商標事務所有限公司 22205
• 代理人: 王偉

技術領域　

本發明涉及一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，屬于植物繁殖技術。

背景技術

在現有技術中，煙草（Nicotiana?tabacum）是茄科煙草屬一年生草本植物。煙草除應用于卷煙工業，還可在開發食品和藥物資源方面有諸多潛在用途。煙葉富含蛋白質，利用鮮煙葉提取蛋白，其畝產量可超過大豆，其他作物更無法相比。煙葉提取的蛋白可制作多種食品，剩下的煙葉仍可用作卷煙的原料。從煙葉中提取煙堿制成醫藥可防治人們的病患，制成農藥可防治農作物害蟲，其前景也是可觀的。煙草是著名的模式作物，可當作生物反應器將其他作物的抗癌、抗艾滋病以及有益于人們健康的基因導入煙草，使其充分表達后利用生物技術提取，進一步加工成藥物。如美國科學家已成功培養出抗體煙草，從中提取抗癌和抗病毒干撓素，對肺癌有良好的治療作用。瑞典科學家將人體基因注入煙草植株，從收獲的煙葉中提出血液蛋白質活化劑，可醫治心臟病等。由此看出，煙草有益于健康的潛在用途并不比用作卷煙所起的經濟效益少。

目前，為適應卷煙工業的需要，在全國煙草種植區內大力發展烤煙種植，但是國內煙葉總體質量較低，與國外特別是美國的煙葉相比有一定差距。出口國外價格低，使用價值不高，只能用作填充料。除煙草種植區劃、施肥、成熟度、烤煙設施和工藝外，大多是煙草病毒病的存在，導致煙草產量和質量的降低。煙草病毒病主要有普通花葉病毒病、黃瓜花葉病毒病、馬鈴薯Y病毒病、蝕紋病毒病。我國各煙區都普遍發生，以云南、貴州、四川、黑龍江、吉林和遼寧等省受害較重。據調查，受害煙田達30%～70%。使煙葉內在品質下降，失去烘烤價值。

以上病毒中，危害較大且普遍的病毒為花葉病毒Tobacco?mosaic?virus(TMV)?，該病毒病自苗床期至大田成株期均可發生。移栽后20天到現蕾期，為發病高峰期，打頂后田間病株仍旱上升趨勢，但主要在煙杈上顯癥，為害不大。幼苗被侵染后，新葉的葉脈組織變淺綠色，呈半透明的“明脈癥”，迎光透視可見病葉大小葉脈十分清晰，幾天后葉片形成黃綠相間的“花葉癥”。大田期，煙株受侵染后，首先在心葉上發現“明脈”現象，爾后呈現花葉、泡斑、畸形、壞死等典型癥狀。輕型花葉只在葉片上形成黃綠相間的斑駁，葉形不變。以往防治多采用高效、高毒、高殘留的化學藥物進行防治，這就導致煙草中含有農藥殘留，使煙草質量和價格降低。我國應該堅持科技興煙，提高烤煙質量，以抗病強品種選育和無病毒煙苗研究為方向的發展模式。

發明內容

本發明的目的是針對上述不足而提供一種方法簡單、操作方便、效果好的試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法。

本發明的技術解決方案是：一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其步驟如下：

（1）將烤煙型煙草品種的種子播于苗盤中，待種子萌發且苗長至3～5?cm時，得處理后莖尖作為外植體備用。

（2）莖尖接種至附加吲哚乙酸0.02～0.05?mg·L^-1和赤霉素1.50～1.70?mg·L^-1，食用白糖10?g·L^-1，瓊脂條8.5?g·L^-1的基本培養基中進行脫除煙草花葉病毒培養；基本培養基成份及使用用量：174?mg·L^-1(NH₄)₂SO₄，360?mg·L^-1KNO₃，122.5?mg·L^-1MgSO₄·7H₂O，218?mg·L^-1KH₂PO₄；18.4?mg·L^-1FeSO₄·7H₂O，24.9?mg·L^-1Na₂·EDTA·2H₂O；12.4?mg·L^-1MnSO₄·4H₂O，7.2?mg·L^-1ZnSO₄·7H₂O，0.32?mg·L^-1KI。優選吲哚乙酸0.02?mg·L^-1和赤霉素1.50?mg·L^-1。

（3）培養溫度控制在52～54?℃，培養48～54?d后，實現煙草花葉病毒脫除。