[發明專利]一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310074450.0
• 申請日: 2013-03-10
• 公開（公告）號: CN103109745A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 顧地周;顧川岳;陸爽;姜云天;朱俊義;程廣有;禚玲玲;張學士;王秋爽;付航;潘雨
• 申請（專利權）人: 通化師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 通化旺維專利商標事務所有限公司 22205
• 代理人: 王偉

1.一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其特征在于步驟如下：

（1）將烤煙型煙草品種的種子播于苗盤中，待種子萌發且苗長至3～5?cm時，得處理后莖尖作為外植體備用；

（2）莖尖接種至附加吲哚乙酸0.02～0.05?mg·L^-1和赤霉素1.50～1.70?mg·L^-1，食用白糖10?g·L^-1，瓊脂條8.5?g·L^-1的基本培養基中進行脫除煙草花葉病毒培養；基本培養基成份及使用用量：174?mg·L^-1(NH₄)₂SO₄，360?mg·L^-1KNO₃，122.5?mg·L^-1MgSO₄·7H₂O，218?mg·L^-1KH₂PO₄；18.4?mg·L^-1FeSO₄·7H₂O，24.9?mg·L^-1Na₂·EDTA·2H₂O；12.4?mg·L^-1MnSO₄·4H₂O，7.2?mg·L^-1ZnSO₄·7H₂O，0.32?mg·L^-1KI；

（3）培養溫度控制在52～54?℃，培養48～54?d后，實現煙草花葉病毒脫除；

（4）當莖尖生長至1.0?cm時，即可切割0.05?cm的莖尖進一步開展無毒苗培養。

2.按照權利要求1所述的一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其特征在于步驟（1）中處理是指將2?cm的莖尖剪下并去除葉片和葉柄，在超凈臺上用70%酒精涮洗10?s，用飽和次氯酸鈉溶液浸泡5?min，無菌水沖洗8次，用無菌濾紙吸干表面水分，切除被殺菌消毒劑損傷部分后切取0.05～0.20?cm的莖尖。

3.按照權利要求1或2所述的一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其特征在于進行脫毒種苗高效快繁體系的建立；具體是待無毒莖尖生長至1.0～1.5?cm和基部生根后，在無菌條件下打開培養瓶，將植株留2葉切下苗干，并割成一葉一段再轉接到上述基本培養基中進行腋芽萌發生長及莖段基部生根培養。

4.按照權利要求3所述的一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其特征在于進行煉苗和移栽；具體是待無毒莖段基部發出3～5條根且長至1.0?cm以上，苗高達2?cm時，從培養瓶中取出試管苗，在含有5?mg·L^-1高錳酸鉀溶液中洗去苗上殘留的瓊脂，然后植入經300倍液多菌靈消毒過的腐爛松針、草炭土和細河砂＝3:2:1混合的基質中，用透光好的塑料薄膜覆蓋以保濕保溫，濕度保持在70%，溫度控制在22±2?℃，每天自然光照10?h，每天中午揭開部分塑料薄膜進行通風換氣30?min，10?d后揭去薄膜，每天早晨噴灑清水1次，無毒苗成活率達95.0%以上。

5.按照權利要求1所述的一種試管內脫除煙草花葉病毒和無毒苗的快速繁殖方法，其特征在于步驟（2）中吲哚乙酸0.02?mg·L^-1和赤霉素1.50?mg·L^-1。