[發(fā)明專利]一種固相制備促胰液素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310073954.0
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103214568A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚志軍;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/645
• 分類號: C07K14/645;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科;孫偉

1.一種固相制備促胰液素的方法，包括以下步驟：

1)選擇合適的固相載體，所述的固相載體為Rink?Amide樹脂、RinkAmide-AM樹脂或Rink?Amide-MBHA樹脂，樹脂替代度為0.1-0.6mmol/g；

2)按照Fmoc固相多肽合成方法，依促胰液素肽序從Val端逐個偶聯(lián)氨基酸，其中，選擇假脯氨酸代替16位和8位Ser，或者假脯氨酸僅代替16位的Ser；

3)裂解，得到粗肽；

4)粗肽經(jīng)純化得到Secretin。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：所述的步驟1)中樹脂替代度為0.1-0.4mmol/g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：所述的步驟1)中樹脂替代度為0.15-0.25mmol/g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：所述的步驟2)中偶聯(lián)劑為DIPCDI+A或者DIPEA+A+B，其中A為HOBt或HOAt，B為PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU中的一種，DIPCDI:A摩爾比為1.3:1.2，DIPEA:A:B摩爾比為2.0:1.2:1.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：步驟3)中裂解試劑為TFA+TA+TIS+EDT+H₂O，TFA：TA：TIS：EDT：H₂O體積比為80～90:0～2:0～3:0～5:0～5。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：步驟3)中裂解試劑為TFA+TA+TIS+EDT+H₂O，TFA：TA：TIS：EDT：H₂O體積比為80～90:0～2:0～3:0～5:0～5。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述的一種固相制備促胰液素的方法，其特征在于：依促胰液素肽序從Val端逐個偶聯(lián)氨基酸是指，首先，F(xiàn)moc-Val-OH與樹脂在偶聯(lián)劑下偶聯(lián)得到Fmoc-Val-樹脂，在脫保護溶劑下脫除Fmoc；與Fmoc-Leu-OH在偶聯(lián)劑作用下偶聯(lián)得到Fmoc-Leu-Val-樹脂，在脫保護溶劑下脫除Fmoc；與Fmoc-Gly-OH在偶聯(lián)劑作用下偶聯(lián)得到Fmoc-Gly-Leu-Val-樹脂，在脫保護溶劑下脫除Fmoc；與Fmoc-Gln-OH在偶聯(lián)劑作用下偶聯(lián)得到Fmoc-Gln-Gly-Leu-Val-樹脂；然后，按照上述方法及下列氨基酸順序依次偶聯(lián):

(1)Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH；

或者(2)Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ala-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH。